文档介绍：人白细胞介素-35 （IL-35 ）酶联免疫分析（ELISA）
试剂盒使用说明书
厦门慧嘉生物科技有限公司
本试剂仅供研究使用
目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关
液体样本中白细胞介素35（ IL-35）的含量
实验原程中如有沉淀形成，应该再次 离心。
尿液：用无菌管收集，离心 20分钟左右（2000-3000转份）。仔细收集上清，保存过程
中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20分钟左右（2000-3000转/
分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用 PBS（ - ）稀释细胞悬液，细胞
浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20分
钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBS，。用液氮迅速冷冻保存备
用。标本融化后仍然保持 2-8C的温度。加入一定量的 PBS （ ）,用手工或匀浆器
将标本匀浆充分。离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待
检测，其余冷冻备用。
标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上
进行试验，可将标本放于 -20 C保存，但应避免反复冻融 .
不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔 10孔，在第一、第二孔中分别加标
准品100 M，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液 50 d，混匀；然后从第一孔、第二
孔中各取100 d分别加到第三孔和第四孔， 再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50 d,
混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取 50 d弃掉，再各取50 d分别加到第五、第六孔
中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各
取50 d分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50 d，混
匀后从第七、第八孔中分别取 50 d加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准
品稀释液50 d，混匀后从第九第十孔中各取 50 d弃掉。（稀释后各孔加样量都为 50 d,
浓度分别为 60ng/L, 40ng/L , 20ng/L , 10ng/L , 5ng/L ）。
加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 、待测样
品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40 d,然后再加待测样品10 d （样
品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混
匀。
温育：用封板膜封板后置 37 C温育30分钟。
配液：将30 （48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 （48T的20倍）倍稀释后备用。
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂 50 d，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔先加入显色剂 A50 d，再加入显色剂 B50