文档介绍：epts,publishedonlineaheadofprinton8January2007利用变性高效液相色谱技术(dHPLC)对CTX-M超广谱β-内酰***酶快速分型LiXu1,2,JasonEvans1,2,ThomasLing3,KathyNye,1andPeterHawkey1,2*通讯地址:HealthProtectionAgency,WestMidlandsPublicHealthLaboratory,HeartofEnglandNHSFoundationTrust,BordesleyGreenEast,Birmingham,B95SS,:44(0):44(0)-mail:peter.******@。本文是第一例将dHPLC应用于细菌β-内酰***酶基因的快速分型的应用报告。该技术适用于所有产CTX-M型超广谱β-内酰***酶(ESBLs)细菌DNA同源群体的基因分型。选用13个定义清晰的blaCTX-M菌株用于开发和优化dHPLC分型方法。进一步的评价了盲选的62个临床样本。结果显示依赖dHPLC的blaCTX-M分型结果与DNA测序结果完全一致。应用新发展的依赖dHPLC的分型技术,我们在为期4个月的临床调研中成功分型所有的73株blaCTX-M菌株。并且,-M-14和CTX-M-1导致的严重性的临床疾病。我们将这项新的dHPLC检测技术总结为精准,快速和经济的blaCTX-M菌株分型技术,在对新的或不同的blaCTX-M基因型临床指导方面,以及流行病学和监测项目方面具有强大的潜在应用价值。epts,publishedonlineaheadofprinton8January2007前言从医院或社区获得性感染革兰阴性杆菌从而产生超广谱β-内酰***酶已成为一个世界性的严重问题(4)。产CTX-M型的超广谱β-内酰***酶(ESBLs),不是TEM或SHV的衍生类型,代表一种新的快速增长的ESBLs分子类型A家族(4)。根据氨基酸序列相似性,他们可以分为5个系统进化群体:群体1,2,8,9和25/26。到目前为止,已有50多个产CTX-M型超广谱β-内酰***酶被定义。()。在英国,产CTX-M-9产酸克雷伯氏菌的分离在利兹首次报道,产CTX-M-9肺炎克雷伯菌的第一次爆发在Birmingham市中心医院(7)。在2002年底,在英国偏远地区分离到的大量产ESBL大肠杆菌被认为与什罗普郡的疾病暴发有关(3)。有趣的是,分析York人群粪便样品中产CTX-M类型ESBL细菌,呈现大量不同分子亚型,包括CTX-M-9,-14和-15(34)。首例分离到CTX-M-3(群体1),CTX-M-17,-18(群体9),CTX-M-8,-40(群体8)类型的β-内酰***酶也是最近从英国报道的(3,16,35)。CTX-M类型ESBLs的多态性和日益增加的流行性表明英国分子流行病的复杂性增加。WhistCTX-M-15是主导类型,但我们注意到ESBLs基因类型正在增加,例如CTX-M-14()。因此需要一种高通量,低成本的方法来检测CTX-Mβ-内酰***酶的特定基因型。大量分子方法,包括多重PCR已经成功的应用于五种群体所有成员的监测(36,39)。然而不借助完整的DNA测序,精确的定义CTX-M类型β-内酰***酶基因任然存在争议。目前,测序还是精确识别的唯一办法,虽然具有耗时和昂贵的缺点。变性高效液性色谱dHPLC是一个相对新的遗传变异检测技术,该技术的应用原理在别的论著中有详细介绍(38)。它已成功的应用于疾病相关基因的突变筛查(13,20),最近几年该技术首次用于细菌鉴别和分子分型,以及随后应用于抗生素抗性基因变异的监测,如对金黄色葡萄球菌,沙门菌,鼠疫耶尔森氏菌和淋病奈瑟菌的gyrA和grlA的突变筛查(10,14,17)。识别突变与抗结核药物抗性间的关联分析在基因rpoB,katG,pncA,rpsL和embB中都已有报道(9,32)。我们研究的主要目的是确定一个灵敏,快速和高通量的CTX-M类型ESBLs的基因分型技术。dHPLC分型技术由三个步骤构成:通过多重PCR分别扩增参照DNA和临床分离DNA,通过对照和待测PCR产物的混合、变性、epts,publishedonlineaheadofprinton8January2007双链;通过dHPLC分析异源DNA。我们首先利用产CTX-M型ESBLs的标准菌株发展了这项技术,而后利用62个过去已定义的临床样本报对该方法作了评估(39)。最后dHPLC方法被应用于探索不同CTX