文档介绍：关于实验一双向琼脂扩散试验
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关于实验一双向琼脂扩散试验
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实验目的：
了解双向琼脂扩散的原理和用途。
掌握抗体效价的测定方法。
观察抗原、抗体在琼脂板中形成的沉淀线。
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可溶性抗原（如细菌浸出液、含菌病料浸出液、血清以及其他来源的蛋白质、多糖质、类脂体等）与其相应的抗体相遇后，在电解质参与下，抗原抗体结合形成白色絮状沉淀，出现白色沉淀线，此种现象称为沉淀反应。
沉淀反应中的抗原叫沉淀原（precipitinogen）,与沉淀原发生反应的抗体称为沉淀素（precipitin）。
沉淀反应主要包括有环状沉淀反应、絮状沉淀反应和琼脂扩散反应。
实验原理
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将可溶性抗原和抗体置于琼脂凝胶板的对应孔中，两者各自在凝胶中向四周自由扩散，
当抗原与抗体相遇，在比例合适时形成可见的白色沉淀线。沉淀线的特征与抗原抗体的浓度、纯度和扩散速率等有关。
双向琼脂扩散试验
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一种抗原抗体系统只出现一条沉淀带
根据沉淀带出现的数目、位置以及相邻二条沉淀带之间的融合、交叉、分枝等情况，就可了解该复合抗原的组成。
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免疫学及免疫学检验
A：Ag、Ab浓度及扩散率近似；B ： Ag、Ab浓度近似，扩散率Ag＞ Ab ；
C：Ag、Ab浓度近似，扩散率Ag＜ Ab ；D： 扩散率近似，浓度Ag ＞ Ab ；E：浓度Ag ＞ Ab，扩散率Ag ＞ Ab ；F：浓度Ag ＜ Ab，扩散率Ag ＜ Ab
沉淀线形状、位置与抗原抗体扩散率及浓度的关系
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免疫学及免疫学检验
(1) 沉淀线吻合：待检抗原与标准抗原完全相同。
(2) 沉淀线相切：待检抗原中含有与标准抗原相同的抗原，还含有另外的抗原与抗血清相对应。
(3) 沉淀线相交：待检抗原有与抗血清对应的抗原，但和标准抗原不同。
(4) 沉淀线部分吻合：待测抗原和标准抗原性质相同，但含量较低。
A1：待检抗原；A2：标准抗原
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抗体效价滴定
用梅花型孔，中间放抗原，
周围孔放下不同稀释度的
相应抗体，以出现沉淀线
的最高稀释倍数为该抗体
的效价。
免疫学及免疫学检验
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材料与试剂
1．琼脂粉
2．平皿
3．打孔器
4．生理盐水或其他缓冲液
5. 抗原、抗体
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操作方法
1．称取一定量的琼脂粉，%的比例加入生理
盐水或缓冲液，煮沸融化。
2．将融化的琼脂倒入平皿内，使厚度2mm～3mm。自然冷却。
3．根据要求（孔径即孔的直径，孔距即两孔圆心之间的距离，包括两孔的半径3－5mm）打成梅花形孔图。
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4．挑出孔内琼脂，注意不要挑破孔缘。
5．在火焰上缓缓加热，使孔底边缘的琼脂少许熔化，以封底，以免加样后液体从孔底渗漏。
6．吸取样品加入孔内(约15ul)，，以加满为度。
7．加毕后，盖上平皿盖，将平皿翻过来，置湿
盘中，37℃自由扩散24h～48h。
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结果判定
．用以检测抗原或比较抗原差异时，将抗血清置中心孔，将待测抗原或需比较的抗原置于周围相邻孔。若出现沉淀带完全融合，证明为同种抗原；若二者有部分相连，表明二者有共同抗原决定簇；若二条沉淀线相互交叉，说明二者抗原完全不同。
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双向免疫扩散凝胶染***
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