文档介绍：微生物学实验教案
实验一、显微镜的使用；细菌的简单染色法；革兰氏染色法
一、目的要求
。
、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色法。
。
，水洗。
（6）镜检 干燥后用油镜观察。
（1）观察前的准备
（2）显微观察
①低倍镜观察
②高倍镜观察
③油镜观察 在高倍镜或低倍镜下找到要观察的样品区域后，用粗调节器将镜筒升高，然后将油镜转到工作位置，在待观察的样品区域加滴香柏油，从侧面注视，用粗调节器将镜筒小心地降下，是油镜浸在镜油中并几乎与标本相接。将聚光器升至最高位置并开足光圈。调节照明使视野的亮度合适，用粗调节器将镜筒徐徐上升，直至视野中出现物像并用细调节器使其清晰准焦为止。
（3）显微镜用毕后的处理
①上升镜筒，取下载玻片。
②用擦镜纸擦区镜头上的油，然后用擦镜纸蘸小许乙醇与***的混合物擦去镜头上残留的油迹，最后再用干净的擦净纸擦去残留的乙醇与***的混合物。
③用擦净纸清洁其他物镜及目镜；用绸布清洁显微镜的金属部件。
④将各部分还原，同时八聚光镜降下。
五、实验报告
（1）绘出三种细菌及细菌三型中的螺旋菌的形态图。
（2）简述细菌的革兰氏染色观察结果。
（1）用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间加什么油？起什么作用？
（2）你认为制备细菌染色标本时，尤其应注意哪些环节？
（3）为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察？
（4）你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？
（5）现有一株细菌宽度明显大于大肠杆菌的粗壮杆菌，请你鉴定其革兰氏染色反应。你怎样运用大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为对照菌株进行涂片染色，以证明你的染色结果正确性。
实验二 荚膜染色法；细菌运动性的观察；微生物大小的测定；显微镜直接计数法
目的要求
学****并掌握荚膜染色法。
学****用压滴法观察细菌的运动性。
学****并掌握用测微尺测定微生物大小的方法。
明确血细胞计数板计数的原理。
掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。
基本原理
荚膜染色法
荚膜是包围在细菌细胞外的一层粘液状或胶质状物质，其成分为多糖、糖蛋白或多肽。由于荚膜与染料的亲和力弱、不易着色；而且可溶于水，易在水冲洗时被除去。所以常用负染色法染色，使菌体和背景着色，而荚膜不着色，在菌体周围形成一透明圈。由于荚膜含水量高，制片时通常不用热固定，以免变形影响观察。
细菌运动性的观察
在显微镜下观察细菌的运动性可初步判断细菌是否有鞭毛。细菌运动性的观察可用压滴法和悬滴法。观察时，要适当减弱光强度以增加反差，若光线太强，细菌和阿周围的液体难以区分。
微生物大小的测定
微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。微生物大小的测定，需要在显微镜下，借助于特殊的测量工具－测微尺，包括目镜测微尺和镜台测微尺。
镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格，每格长10μm。镜台测位尺并不是直接用来测量细胞的大小，而是用于校正目镜测微尺每格的相对长度。
目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，有等分为50小格和100小格两种。测量时需将其放在接目镜的隔板上，用以测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目镜测微尺每小格所代表的实际长度也不一样。因此，用目镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定放大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。然后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞的实际大小。
球菌用直径来表示其大小；杆菌则用宽和长的范围来表示。
显微镜直接计数法
用血细胞计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生物计数方法。该计数板是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上刻有一个方格网，每个方格网共分为九个大方格，中间的大方格即计数室。计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格；另一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格，但无论是哪一种规格的计数板，每一个大方格中的小方格都是400个。每一个大方格边长为1mm，则一个大方格的面积为1mm
2，盖上盖玻片后，，所以计数室的容积是1mm3。
计数时，通常数五个中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均值，再乘上25或16，就得出一个大方格的总菌数，然后再换算成1ml菌液中的总菌数。
设五个