文档介绍：乳酸菌镜检方法及显微
镜使用方法
-CAL-FENGHAL-(YICAI)-Company One 1
乳酸菌精简方法及显微镜使用方法
第一局部：乳酸菌镜检可以采用革兰氏染色方法.
第二局部：使用显微镜的油镜进行镜检, 下
乳酸菌镜检方法及显微
镜使用方法
-CAL-FENGHAL-(YICAI)-Company One 1
乳酸菌精简方法及显微镜使用方法
第一局部：乳酸菌镜检可以采用革兰氏染色方法.
第二局部：使用显微镜的油镜进行镜检, 下而是具体的染色方法和镜检方法,请参考.
第一局部=乳酸菌革兰氏染色方法
1目的
在乳酸菌发放之前,利用标准的革兰氏染色法对即将发放的乳酸菌
悬液或乳酸菌样品进行检测,观察乳酸菌乳酸菌在显微镜下的形态.
2原理
通过结晶紫初染和碘液媒染后,在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物,革兰氏阳性菌山于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密,故遇乙醇脱色处理时,因失水反而使网孔缩小,再加上它不含类脂,故乙醇处理不会出现缝隙,因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在墜内,使其仍呈紫色：而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差,在遇脱色剂后,以类脂为主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出,因此通过乙醇脱色后仍呈无色,再经沙黄等红色染料复染,就使革兰氏阴性菌呈红色.
3实验用品准备:
灭菌玻片、lO-lOOul移液器、lO-lOOul灭菌移液吸头、lOOul- lOOOul移液器、lOOul-lOOOul移液吸头、接种环、酒精灯、打火机、革兰氏染色液、吸水纸、显微镜、香柏油、擦镜纸、计时器
4操作:
1涂片：取灭过菌的载玻片于实验台上,用移液枪吸取lOul待检样品滴在载玻片的中央,用烧红冷却后的接种环将液滴涂布成一均匀的薄层,涂布面不宜过大.
2枯燥：将标本面向上,手持载玻片一端的两侧,小心地在酒精灯上高处微微加热,使水分蒸发,但切勿紧靠火焰或加热时间过长,以防标本烤枯而变形.
固定:
初染:
水洗:
媒染:
水洗:
脱色:
固定常常利用高温,手持载玻片的一端,标本向上,在酒精灯火焰处尽快的往返通过2-3次,共约2-3秒种,并不时以载玻片反面加热触及皮肤,不觉过烫为宜〔不超过6〔rc〕,放置待冷后,进行染色.
在涂片薄膜上滴加草酸银结晶紫「2滴,使染色液覆盖涂片,染色约 Imino
斜置载玻片,在自来水龙头下用小股水流冲洗,直至洗下的水呈无色为止.
用lOO-lOOOul移液枪吸取约300U1碘液滴在涂片薄膜上,使染色液覆盖涂片,
斜置载玻片, 色为止.
斜置载玻片,
染色约Imino
在自来水龙头下用小股水流冲洗,直至洗下的水呈无
滴加95%乙醇脱色,至流出的乙醇不现紫色为止,大
约需时20-30S,随即水洗.
复染:
在涂片薄膜上滴加沙黄染液「2滴,使染色液覆盖涂片,染色约 Imirio
10水洗：斜置载玻片,在自来水龙头下用小股水流冲洗,直至洗下的水呈无色为止.
11枯燥、观察：用吸水纸吸掉水滴,待标本片干后置显微镜下,用低倍镜观察,发现U的物后滴一滴浸油在玻片上,用油镜观察细菌的形态及颜色,紫色的是革兰氏阳性菌,红色的是革