文档介绍：
1、将alginate粉末紫外光下照耀12h
2、%alginate
3、配置4%CaCl2 通过过滤网灭菌
4、预热培育液、PBS 液和胰蛋白酶
5、培育箱内取出细胞
图1：高分子溶液搅拌
细胞传代培育过程：
传代前打算： 1） .预热培育用液：把已经配制好的装有培育液、PBS 液和胰蛋白酶的瓶子放入 37℃水浴锅内预热。 2） .点燃酒精灯；打算好将要运用的无菌培育皿或者培育瓶；取出预热好的培育用液：取出已经预热好的培育用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。
3）.从培育箱内取出细胞：不行倒置培育皿，用酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下视察细胞。
4） .打开瓶口：将各瓶口一一打开，同时要在酒精灯上烧口消毒。 胰蛋白酶消化；
1） .加入消化液：当心吸出旧培育液，用 PBS冲洗，加入适量胰蛋白酶液，消化液的量以盖住细胞最好。
2） .显微镜下视察细胞：倒置显微镜下视察消化细胞，若胞质回缩，细胞之间不再连接成片，表明此时细胞消化适度。
3） .吸弃消化液加入培育液：弃去胰蛋白酶液，留意更换吸管，加入簇新的培育液。 吹打分散细胞：
1） .吹打制悬：用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。
2） .吸细胞悬液入离心管：将细胞悬液吸入 10ml 离心管中。
3） .平衡离心：平衡后将离心管放入台式离心机中，以 1000 转/分钟离心 3-5 分钟。 4） .弃上清液，加入新培育液：弃去上清液，加入 2ml 培育液，用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。
图2：吹打分散细胞 分装稀释细胞：
1） .分装：将细胞悬液吸出分装至 2-3 个培育瓶中，加入适量培育基旋紧瓶盖。
图
3、
4、5：分装好的细胞
2） .显微镜下视察细胞：倒置显微镜下视察细胞量，必要是计数。留意密度过小会影响传代细胞的生长，传代细胞的密度应当不低于 5×105/ml。最终要做好标记。 细胞计数：66 细胞浓度（细胞数/ml） =4 个大方格内活细胞数/4×104×稀释倍数=×104 接着培育：
图6：细胞在培育皿中贴壁生长 图7：细胞在海藻酸钠中封装
细胞冻存试验过程：
（ 1）冻存前一天换液，取细胞形态好和无污染培育瓶换液。
（ 2）冻存盒中液体为异丙醇，每冻存 5 次后更换一次。 4℃预冷。
（3）混合消化液消化细胞，终止消化后离心 1000 r/min， 5 分钟，弃上清，加入 4℃4预冷的冷冻保存液重悬，调整细胞浓度为（ 1-2）×106-107/ml。
（ 5）将细胞悬液分装至 2ml 冻存管中，每管 1～ ml；将冻存管口封，贴上标签 （ 6）放入 4 度预冷的程序性降温盒中， -80 度冰箱过夜后取出放入液氮罐中。慢冻快融。
细胞的复苏试验过程(由于设备故障未进行，以下为理论了解)：
细胞复苏的原则－快速溶化：必需将冻存在-196 ℃液氮中的细胞快速溶化至 37 ℃，使细胞外冻存时的冰晶快速溶化，避开冰晶缓慢溶化时进入细胞形成再结晶