文档介绍：实验六ABO血型鉴定、血涂片的制作与血细胞显微观察(精)
实验六ABO血型鉴定、血涂片的制作与血细胞显微观察(精)
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实验六ABO血型鉴定、血涂片的制作与血细胞显微观察(精)
实验六：ABO血型鉴定、血涂片的制
白细胞分类计数:
选择涂片的体尾交界处染色良好的区域
,
在油镜下计数100
个红细胞,
按其形态特征进行分类计数
,
求出各类细胞所占比值。
注：
:瑞氏染料1g
加甲醇(AR)600ML
。将瑞氏染料放在清洁干燥乳钵中
,
加少量甲醇,
充分研磨使染料溶解
.
将已完全溶解的部分倒入棕色试剂瓶中
,
未溶解部
分再加少量甲醇研磨
,
直至染料完全溶解于甲醇为止.
新配制的染料偏碱
,
须在室温和
37℃下一定时间待染料成熟
,
主要美蓝逐渐增多为天
青B后才能使用.
贮存时间越久染色效果越好
,
因此,Deamgilliland
等采用吸光度比
值(rA)作为瑞氏染料的质量规格
.rA
测定方法如下
:
取瑞氏染液
15-25ul(
视染液浓
度而定)
加甲醇
10ml稀释,
混匀后以甲醇为空白管分别以波长
650nm,525nm
比
色,rA=A650/A525
。因为美蓝吸收峰为波长
650nm,伊红吸收峰波长为
525nm,
天青B
吸
收峰也为650nm,
但吸光度A
约为美蓝的一半.
所以新配制染料的
RA
接近2,随着美
蓝逐渐氧化为天青
B,RA也相应下降,RA
下降达
±
即可使用
.
瑞氏染料在贮存
过程中必须塞严
,
以防甲醇挥发和氧化为甲酸.
有人主张配方中加入
30ml甘油,
防止
甲酸挥发,
并可使细胞染色清晰
.甲醇必须纯净
,
如甲醇中***含量过多
,
染色偏酸,
使细胞着色不良.
(-)
至1000ml,配制成磷酸盐缓冲液调整
：
PH,如无缓冲液可用新鲜蒸馏水代替
细胞类别***
杆状核
分叶核
.
再加蒸馏水
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嗜酸性粒细胞
嗜碱性粒细胞0-
淋巴细胞
单核细胞
四、注意事项
玻片的清洗：新玻片常有游离碱质,因此应用清洗液或10%盐酸浸泡24小时,
然后再彻底清洗。用过的玻片可放入适量肥皂水或合成洗涤剂的清水中煮沸20分钟,再
用热水将肥皂和血膜洗去,用自来水反复冲洗,必要时再置95%乙醇中