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PCR扩增的原理和步骤
聚合酶链反应(polymerasechainreactionPCR)技术是20世纪80年代中期发展起来的一项基因检测即一种体外核酸扩增技术。它具有许多优点：特异性、易重复、高效性等，可以在几个小时完成过去几天光定量PCR技术定量方法
在实时荧光定量PCR中模板定量有两种：绝对定量和相对定量。绝对定量指的是用已知的标准曲线来推算未知的样本的量。绝对定量的标准样品一般是指含有和待测样品相同扩增片段的克隆质粒、含有和待测样品相同扩增片段的cDNA，PCR的产物，把它们分别稀释为不同的浓度作为模板进行反应。横坐标为标准品拷贝数的对数值，纵坐标为得到的CT值，可做出标准曲线，根据未知样本的CT值，可在标准曲线中得到样本的拷贝数进而对未知样本进行定量。相对定量是在一定样本中靶序列相对于另一参照样本的量的变化，也就是比较经过处理的样本和未经处理的样本之间的相对基因表达差异。常用方法有标准曲线法和CT法，后者是分析基因表达相对变化的一种简便方法。
三、实时荧光定量PCR技术的应用
实时荧光定量PCR具有灵敏度高、特异性高和精确性高的优点，此项技术已被应用于分子生物学、医学、食品检测和环境监测等多个领域。
在分子生物学领域的研究应用（1）定量核酸浓度传统方法是用琼脂糖凝胶电泳或者分光光度计测定核酸浓度，其结果不准确而且易污染，实时荧光定量PCR可以解决这些问题，它准确性、灵敏度高且无污染，对一些传染性疾病进行定量分析、病原微生物和病毒含量检测，此项技术都是首选。
（2）研究基因表达
应用实时定量PCR技术可以对基因时间、空间表达水平差异进行比较。例如，对特定基因用物理、化学、药物等不同方法处理后的差异进行比较，为人们的科学研究提供依据。
（3）用于单核苷酸多态性（SNP）检测分析人们对疾病的易感性和对同一种药物治疗同一种疾病的效果是有差异性的，遗传物质DNA的多态性RELP，STR，ABO血型和SNP是个体差异的遗传基础。SNP在人类基因组中广泛存在，是人类可遗传变异中最常见的一种，在遗传性疾病的研究中具有重要意义。
（4）DNA***化检测
DNA***化是表观遗传学重要的标记信息，通过实时荧光定量PCR技术获得基因组***化水平数据对表观遗传学的时空特异性研究具有重要意义。
1. 在医学领域的研究应用（1）用于病原体检测
常规PCR不能定量，在操作中易污染导致出现假阳性结果，应用实时荧光定量PCR技术可以解决这些问题。目前，此项技术已应用于检测丙肝病毒、宫颈癌及其癌前病变有关的人类乳头瘤病毒、抗结核药物治疗后定量检测病人痰样本病原体DNA含量，为疾病的诊断和治疗提供依据。用此项技术还可以一次性检测大量大肠杆菌样本，简便准确，是食品检测方面的一个突破。
（2）肿瘤基因检测
肿瘤发生机制非常复杂，发病机理尚未清楚，随着基因分子水平研究不断发展，肿瘤基因发生突变等遗传学改变是致癌性发生的根本原因已被广泛接受。癌基因表达异常和突变在多种肿瘤早期和良性阶段就已出现，通过实时荧光定量PCR检测可检测到基因突变，准确测定其表达量，为肿瘤早发现、早诊断、早治疗及疗效和预后的判断提供依据。
（3）用于药物选择和疗效判断化疗过程中主要问题是病人对化疗药物的耐药，检测肿瘤耐药基因的表达水平是选择化疗药物的依据。检测微小残留病变的变