文档介绍：实验二酶联免疫吸附试验
①了解ELISA反应原理、类型及特点
②掌握直接ELISA操作步骤
③通过实验认识抗体的双重性
① 抗原或抗体能物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部实验二酶联免疫吸附试验
①了解ELISA反应原理、类型及特点
②掌握直接ELISA操作步骤
③通过实验认识抗体的双重性
① 抗原或抗体能物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，吸附后的抗原或抗体仍保持其免疫学活性。
②酶可与抗体通过共价键连接而形成酶标记抗体，这种结合作用并不影响抗体的免疫学活性和酶的催化活性。
③酶标抗体中的酶可催化无色底物形成有色产物，酶标抗体与相应抗原或抗体结合后，可根据有无颜色反应来判定是否有免疫反应发生，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比，因此，可以按底物显色的程度来显示试验结果。
微量移液器，酶标仪、洗板机、96孔酶标板、PHSJ-4A型pH计等
显色剂（TMB）、兔抗鸡IgG-HRP、牛血清白蛋白（BSA）、
Tween-20、标准品鸡IgG
各种缓冲液
（1）包被液（ M碳酸盐缓冲液， pH ）
Na2C03 g, NaHCO3 g, 加DDH20（DDW） 至1 L，用精密pH计调整pH值到9．6；
（2）封闭液
3％BSA，3g BSA溶于100 mL PBS中,调整PH ；
（3）洗涤及稀释液PBST和PBS(PH )
PBS缓冲液
NaCl g， KCL g，Na2HPO4•12H2O g KH2PO4 溶于1000mL蒸馏水，，高温高压灭菌。1L PBS（pH ） Tween-20配制成PBST。
（4）封闭液
g BSA溶于100 mL PBST中；
（5）底物Buffer
gNa2HPO4·12H2O溶于100 mL去离子水中， mL于100 mL容量瓶中； gC6H8O7•H2O溶于100 mL去离子水中， mL于容量瓶中；再加约50 mL去离子水定容，。
（6）TMB工作液
底物A：TMB 40mg，无水乙醇或DMSO 10 mL；
底物B： 250 μL的A溶液，加10 mL底物Buffer，临用加20 μL H2O2；
最好现用现配。 Substrate A,B液必须4℃，避光保存。
（7）终止液
2M H2SO4：浓H2SO4 20 ml，加水至180 mL；
（8）酶标抗体
兔抗鸡IgG-HRP，用PBST稀释；4℃保存30 d；
4. 操作步骤
① 抗原包被
在酶标板上包被稀释好的标准鸡IgG，每孔加1