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上传人:wz_198613 2022/3/24 文件大小:288 KB

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文档介绍

文档介绍:武汉长江工商学院
生物酶工程技术论文
院: 工学院
专业: 生物工程 年级: 10
题目: α-淀粉酶的酶学性质PAGE法测定α-淀粉酶相对分子质量。通过研究淀粉酶的性质,能使我们更好的了解它,并充分利用于工业生产、食品加工、医疗等产业。

1.1材料与设备
材料: α-淀粉酶;可溶性淀粉,硫酸,葡萄糖(粉末),氢氧化钠(粉末),3,5-二硝基水杨酸,酒石酸钾钠,柠檬酸,柠檬酸钠,磷酸氢二钠,磷酸二氢钠,甘氨酸,考马斯亮蓝G-250,95%乙醇,85%磷酸
主要仪器:试管,恒温水浴锅,722型分光光度计,分析天平,烧杯,容量瓶,具塞刻度试管,玻璃棒,移液管,胶头滴管,洗耳球,垂直板电泳槽,电炉[1]


1)1%α-淀粉酶液的配制[2]
准确称取α-,适量水溶解后定容至50 mL,即得1%α-淀粉酶液,放入冰箱中保存,用时需过滤。
2)1%淀粉溶液
,用适量蒸馏水溶解后沸水浴中煮沸3min后定容至50ml,临用现配。
3)3,5-二硝基水杨酸[3]
精确称取3,5-二硝基水杨酸10g,溶于200ml 2mol/lNaOH溶液中,加入500 ml蒸馏水,再加入300g酒石酸钾钠,待溶解后用蒸馏水定容至1000ml,摇匀后分装至试剂瓶中冰箱中保存。
4)
,用蒸馏水溶解并定容至1000ml。
5)
,用蒸馏水溶解并定容至1000ml。
6)[4]
,用蒸馏水溶解定容至1000ml。
7)
,用蒸馏水溶解定容至1000ml。
8)甘氨酸-氢氧化钠缓冲液()
,用蒸馏水溶解定容至100ml,。
甘氨酸-氢氧化钠缓冲液,,8ml [5]。

取7只干净的具塞刻度试管,编号,按下表加入试剂,混匀,置沸水浴中煮沸5min,取出后流水冷却,加蒸馏水定容至25ml。以1号管作为空白调零点,在540nm波长下比色测定[5]。以葡萄糖含量为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线[6]。
表1试剂加入量
试管号
1
2
3
4
5
6
7
葡萄糖标准溶液/ml
0






蒸馏水/ml






0
3,5二硝基水杨酸
2
2
2
2
2
2
2
按表1测得各个试管吸光度如表2
表2 吸光度值
试管编号
1
2
3
4
5
6
7
葡萄糖含量(mg/ml)
0






吸光度A
0






以标准葡萄糖含量为横坐标,光密度值为纵坐标,做出标准曲线图1,求出标准曲线方程。
图1糖含量标准曲线
-淀粉酶酶学性质研究关键技术
α-淀粉酶最适温度研究关键技术
研究α-淀粉酶最适温度设置如下9个温度梯度:30℃、40℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃、80℃、90℃,且需假设一个PH作为最适PH,又已知所选α--,,
样品α-淀粉酶活力测定步骤:
取每个温度下4支试管,标明1支为对照管,3支为测定管。
于每管中各加酶液1ml,对照管中另加入4ml ,在相应温度下保温15min,再向各管分别加入对应温度下预热的1%淀粉溶液2ml,摇匀,立即放入对应温度恒温水浴,准确计时保温5min,取出后向测定管中迅速加入4ml ,终止酶活动,准备测糖[7]。
样品的测定:取酶作用后的各管溶液2ml,分别放入相应的25ml具塞刻度试管中,各加入2ml 3,5-二硝基水杨酸试剂。以下操作同标准曲线制作。根据样品比色吸光度,从标准曲线查出葡萄糖含量,最后进行结果计算。本实验设定60℃时在5min内水解淀粉释放1mg葡萄糖所需的酶量为1个酶活力单位(