文档介绍：武汉长江工商学院
生物酶工程技术论文
院： 工学院
专业： 生物工程 年级： 10
题目: α-淀粉酶的酶学性质PAGE法测定α-淀粉酶相对分子质量。通过研究淀粉酶的性质，能使我们更好的了解它，并充分利用于工业生产、食品加工、医疗等产业。
1．1材料与设备
材料: α-淀粉酶；可溶性淀粉，硫酸，葡萄糖（粉末），氢氧化钠(粉末)，3,5-二硝基水杨酸，酒石酸钾钠，柠檬酸，柠檬酸钠，磷酸氢二钠，磷酸二氢钠，甘氨酸，考马斯亮蓝G-250,95%乙醇，85%磷酸
主要仪器:试管，恒温水浴锅，722型分光光度计，分析天平，烧杯，容量瓶，具塞刻度试管，玻璃棒，移液管，胶头滴管，洗耳球，垂直板电泳槽，电炉[1]
1）1%α-淀粉酶液的配制[2]
准确称取α-，适量水溶解后定容至50 mL，即得1％α-淀粉酶液，放入冰箱中保存，用时需过滤。
2）1%淀粉溶液
,用适量蒸馏水溶解后沸水浴中煮沸3min后定容至50ml，临用现配。
3）3,5-二硝基水杨酸[3]
精确称取3,5-二硝基水杨酸10g，溶于200ml 2mol/lNaOH溶液中，加入500 ml蒸馏水，再加入300g酒石酸钾钠，待溶解后用蒸馏水定容至1000ml,摇匀后分装至试剂瓶中冰箱中保存。
4）
，用蒸馏水溶解并定容至1000ml。
5）
，用蒸馏水溶解并定容至1000ml。
6）[4]
，用蒸馏水溶解定容至1000ml。
7)
,用蒸馏水溶解定容至1000ml。
8）甘氨酸-氢氧化钠缓冲液（）
，用蒸馏水溶解定容至100ml,。
甘氨酸-氢氧化钠缓冲液，，8ml [5]。
取7只干净的具塞刻度试管，编号，按下表加入试剂，混匀，置沸水浴中煮沸5min,取出后流水冷却，加蒸馏水定容至25ml。以1号管作为空白调零点，在540nm波长下比色测定[5]。以葡萄糖含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线[6]。
表1试剂加入量
试管号
1
2
3
4
5
6
7
葡萄糖标准溶液/ml
0
蒸馏水/ml
0
3,5二硝基水杨酸
2
2
2
2
2
2
2
按表1测得各个试管吸光度如表2
表2 吸光度值
试管编号
1
2
3
4
5
6
7
葡萄糖含量（mg/ml）
0
吸光度A
0
以标准葡萄糖含量为横坐标，光密度值为纵坐标，做出标准曲线图1，求出标准曲线方程。
图1糖含量标准曲线
-淀粉酶酶学性质研究关键技术
α-淀粉酶最适温度研究关键技术
研究α-淀粉酶最适温度设置如下9个温度梯度：30℃、40℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃、80℃、90℃，且需假设一个PH作为最适PH，又已知所选α--,，
样品α-淀粉酶活力测定步骤：
取每个温度下4支试管，标明1支为对照管，3支为测定管。
于每管中各加酶液1ml，对照管中另加入4ml ，在相应温度下保温15min，再向各管分别加入对应温度下预热的1%淀粉溶液2ml,摇匀，立即放入对应温度恒温水浴，准确计时保温5min,取出后向测定管中迅速加入4ml ，终止酶活动，准备测糖[7]。
样品的测定：取酶作用后的各管溶液2ml，分别放入相应的25ml具塞刻度试管中，各加入2ml 3,5-二硝基水杨酸试剂。以下操作同标准曲线制作。根据样品比色吸光度，从标准曲线查出葡萄糖含量，最后进行结果计算。本实验设定60℃时在5min内水解淀粉释放1mg葡萄糖所需的酶量为1个酶活力单位（