文档介绍：不同DNA提取方法对肺癌血浆循环DNA抽提效果比较
 
 
李旺胜 唐一通 张楚微 王书菲 徐洲 杜陈 金钊
摘要：目的：研究不同DNA抽提方法对肺癌血浆循环DNA的提取效果。方法：选取68例肺癌患者为研究对象，比较GenM2℃ 40 S；40 循环，72 ℃ 3 min。以血清游离DNA提取试剂盒（磁珠法）提取循环DNA模板扩增条带为参照，用BIO-RAD凝胶成像分析系统测定其他两种方法对应扩增条带相对亮度比值，用以比较三种方法对循环DNA的抽提效果。选取同一血浆样本，三种方法分别重复提取5次，进行PCR扩增，比较不同方法扩增条带亮度差异情况，计算各方法的变异系数（CV）。
：，多个样本的比较采用x2检验。
二、结果
。三种提取方法中，磁珠法对应泳道扩增条带亮度最大，SanPrep柱式PCR产物纯化试剂盒方法次之，苯酚-***仿法最弱（见图1）。SanPrep柱式PCR产物纯化试剂盒方法和苯酚-***仿法与磁珠法相比，其提取效率分别为67%%和49%（P<）。因此，三种方法中，磁珠法具有最高的提取效率，见表1。
：通过比较各方法5次PCR扩增条带亮度差异值，磁珠方法的变异系数（CV）小于其他两种方法，说明磁珠法的重复性好，其他两种方法较差（P<），见表1。
三、讨论
外周血循环DNA来自于肿瘤细胞的坏死和脱落，研究表明，肺癌肿瘤患者外周血循环DNA含量显著高于正常人，并且在基因遗传性上与肿瘤原发组织具有高度的一致性[1，2]。提示循环DNA可为肺癌筛查、诊断及预后检测提供微创、方便的标本来源及检测对象。
Szpechcinski等[3]分别对16例健康***和30例未经治疗的非小细胞肺癌（NSCLC）患者循环DNA进行定量研究，结果显示，—，—50ng/mL，提示非小细胞肺癌患者循环DNA含量大大增加，表明其作为一种肿瘤标志物具有重要意义。也有报道指出循环DNA的定量对于肺癌的分期、化疗监测等有着重要的意义，可作为肿瘤临床治疗的一种依据[4]。
近年来，把基因突变与肺癌的临床治疗相结合，开展EGFR、Kras等肿瘤标记基因个体化用药检测的研究得到快速发展[5，6]。王开云等[7]报道非小细胞肺癌患者血清循环
DNA检测EGFR基因突变与肿瘤组织检测具有高度的一致性，对肺癌患者的诊断、筛查和治疗有着重要的意义。
由于血清中循环DNA含量极低，并且具有小片段的特征，因此，在提取时容易丢失，从而影响检测的灵敏度。可靠有效的循环DNA提取方法对研究结果影响很大。本文通过对几种提取方法的提取效果比较显示，磁珠法具有最高的提取效率和最低的CV值，认为磁珠法对乳腺癌患者血清循环DNA的提取效果最好，尤其适用于小片断DNA的提取。
参考文献：
[1]R M Bremnes，R Sirera，C tumour-derived DNA and RNA markers in blood：a tool for early detection，diagnostics，and follow-up[J].Lung Cancer，200