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无菌检査方法的验证
无菌检查方法的验证
无菌检查方法是为了检查药典要求无菌的制剂及其他制品是否无菌而建立的试验方法，是作为无菌产品批放行的重要依据及药监部门对无菌产品质量监管的一个重要项口。因此如何确保无菌检查方法的准确可靠至关重用中和剂或灭活方法有：对氨基苯屮酸、卵磷脂、聚山梨酯-80等。对化学中和剂不敏感的样品，用酶中和，如B-内酰***酶。联合使用：将以上两种或儿种方法组合运用，以消除样品的抑菌性。适用于抑菌作用较强的中西药制剂。
其次按照以下要求制备3组样品：
样品组：选择以上适当的方法中和样品，加入少量验证微生物（接种量少于100?cfu）。
对照组：***化钠-蛋口腺缓冲液,加少量微生物（接种量少于100?cfu）o
阳性对照组：将试验菌株直接接种于培养基中（接种量少于lOOcfu）o最后结果分析如下：
样品组与对照组微生物生长数量相似，表明中和剂的中和方式有效消除了样品的抑菌性（即有效性），如果对照组与阳性对照组的微生物数量相似，表明样品预处理、消除样品抑菌性的方法、检测程序和培养条件等均不影响微生物生长（即无毒性）。样品如无抑菌性，省去对照组试验，样品组与阳性对照组直接比较。样品组微生物生长数量不及阳性对照组微生物生长数量，表明样品的预处理、试验用器具材料、培养条件等方面存在对微生物生长不利的因素。
为考查验证方法的稳定性和重现性，验证至少需3个不同批次的同类样品，分别进行3次验证试验。
无菌检查方法验证试验设讣
薄膜过滤法：按照药典的要求取每种培养基规定接种的样品总量按薄膜过滤法过滤、冲洗，在最后一次的冲洗液中加入小于lOOcfu的试验菌，过滤。取出滤膜接种至硫乙醇酸盐流体培养或改良马丁培养基中，或将培养基加至滤桶内。另取一装有同体积培养基的容器，加入等量试验菌，作为对照。按照药典的要求的温度和时间进行培养。
直接接种法：取符合直接接种法培养基用量要求的硫乙醇酸盐流体培养基8管，分别接入小于lOOcfu的金黃色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽抱杆菌、生砲梭菌各2管;取符合直接接种法培养基用量要求的改良马丁培养基4管，分别接入小于100?cfu的白色念珠菌、黑曲霉各2管。其中1管接入每支培养基规定的供试品接种量，另1管作为对照，按照药典的要求的温度和时间进行培养。结果判断
同对照管比较，如含供试品各容器中的试验菌均生长良好，则说明验证通过;如含供试品的任一容器中的试验菌生长微弱、缓慢或不生长，验证失败，应采用增加冲洗量、增加培养基的用量、使用中和剂和灭活剂、更换滤膜等方法，消除供试品的抑菌作用，重新进行验证。
新GMP检查重点
首先要检查方法验证方案设讣的科学性和完整性，是否有与药典方法相悖的地方，尤其是产品本身的抑菌性，检查方法的选择，是直接接种法还是薄膜过滤法等。
无菌检查方法验证的硬件是否具备及是否已经进行了相关的确认。如使用黑曲霉菌是否具有生物安全柜并进行确认，无菌室的确认及日常监测，培养箱的型号及数量和进行确认的情况等，智能集菌器、全封闭无菌试验过滤培养器的型号、性能，滤膜是否符合规定等。
验证中各个环节有关数据的真实性，如产品本身抑菌性试验数据，菌种回收率和培养基适用性和灵敬度检查数据，菌种的传代、销毁和使用记录，无菌检查操作记录、培养记录等。无菌检查中偏差的处理是否真