文档介绍：PCR实验报告
普通生物学实验报告
实验名称：用PCR扩增的方法鉴别不同物种来源的肌肉
一、特异性目的片段DNA的扩增
〔一〕实验原理
聚合酶链式反响〔Polymerase Chain React
PCR实验报告
普通生物学实验报告
实验名称：用PCR扩增的方法鉴别不同物种来源的肌肉
一、特异性目的片段DNA的扩增
〔一〕实验原理
聚合酶链式反响〔Polymerase Chain Reaction,PCR〕是体外酶促合成特异DN***段的一种方法，其根本原理为DNA的半保存复制。PCR技术由①高温变性模板 ；②引物与模板退火；③引物沿模板延伸这3步反响组成一个循环，通过屡次循环反响，目的DNA得以迅速扩增。其主要步骤是：将模板DNA置于高温下〔通常为93℃-94℃〕，使其变性解成单链；人工合成的两个寡核苷酸引物在其适宜的复性温度下分别与目的基因的两条单链互补结合；热稳定DNA聚合酶〔Taq酶)在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入，以目的基因为模板按5’→ 3’的方向延伸，合成互补链。
本实验采用物种特异性引物扩增的方法来鉴定3种不同物种来源的肌肉。以不同物种来源的动物DNA为模板，用物种特异性的引物进行PCR扩增，只有在模板和引物的物种相对应的情况下才会有特异性条带的出现。应用此方法，可以特异性地检测样品中痕量的特定DNA成分。
实验步骤
不同反响体系的配制
按下表将各成分分别参加一做好标记的无菌PCR管中，配制50μl的PCR反响体系，注意酶要最后加，加完后将PCR管放置在冰上。
10×PCR缓冲液
5μl
5μl
5μl
5μl
5μl
5μl
dNTP mix(2,5mM each)
4μl
4μl
4μl
4μl
4μl
4μl
模板
DNA1
2μl
2μl
_____
_____
_____
_____
DNA2
_____
_____
2μl
2μl
_____
_____
DNA3
_____
_____
_____
_____
2μl
2μl
引物
Pork1
(10μM〕
2μl
_____
2μl
_____
2μl
_____
Pork2
(10μM〕
2μl
_____
2μl
_____
2μl
_____
Beef1
(10μM〕
_____
2μl
_____
2μl
_____
2μl
Beef2
(10μM〕
_____
2μl
_____
2μl
_____
2μl
Taq酶〔5U/ μl〕
ddH2O
将上述混合液稍加离心，约10s左右。取下后立即置于PCR仪中，盖紧热盖，定好PCR仪的反响程序，执行扩增程序。
反响程序为：
预变性 94℃ 5min
变