文档介绍：关于实验二细菌的简单染色与革兰氏染色
第一页，讲稿共二十页哦
一、目的要求
1、巩固显微镜的使用方法；
2、掌握细菌的简单染色和革兰氏染色的原
理和方法。
第二页，讲稿共二十页哦
二、基本原理
第三页，讲关于实验二细菌的简单染色与革兰氏染色
第一页，讲稿共二十页哦
一、目的要求
1、巩固显微镜的使用方法；
2、掌握细菌的简单染色和革兰氏染色的原
理和方法。
第二页，讲稿共二十页哦
二、基本原理
第三页，讲稿共二十页哦
革 兰 氏 染 色
用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。
碱性染料的离子带正电荷，能和带负电荷的物质结合。因细菌蛋白质等电点较低，当它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，所以通常采用碱性染料（如美兰、结晶紫、碱性复红或孔雀绿等）使其着色。
酸性染料的离子带负电荷，能与带正电荷的物质结合。当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时，细菌所带正电荷增加，因此易被伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料着色。
中性染料是前两者的结合物又称复合染料，如伊红美兰、伊红天青等。
第四页，讲稿共二十页哦
简单染色法是只用一种染料使细菌着色以显示其形态，简单染色不能辨别细菌细胞的构造。
。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。该染色法所以能将细菌分为G+菌和G-菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。
第五页，讲稿共二十页哦
革兰氏阳性和阴性菌细胞壁成分比较
成分 占细胞壁干重的% 革兰氏阳性菌 革兰氏阴性菌
肽聚糖 含量很高（50-90） 含量很低（~10）
磷壁酸 含量较高（<50） 无
类脂质 一般无（ < 2） 含量较高（~20）
蛋白质 无 含量较高
第六页，讲稿共二十页哦
G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或***脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经沙黄复染后就成红色。
G菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。
第七页，讲稿共二十页哦
三、实验器材
1、材料
培养12-16h的枯草杆菌（Bacillus subtilis），培养24小时的大肠杆菌（Escherichia coli）
2、染色液和试剂
草酸铵结晶紫、碘液、95%乙醇、沙黄、二甲苯、香柏油
3、器材
废液缸、洗瓶、载玻片、接种环、酒精灯、擦镜纸、显微镜等。
第八页，讲稿共二十页哦
四、实验方法及步骤
1、简单染色
（1）涂片 取干净载玻片一块，在载玻片的左、右各加一滴蒸馏水，按无菌操作法取菌涂片，左边涂枯草杆菌，右边涂大肠杆菌，做成浓菌液。再取干净载玻片一块将刚制成的枯草杆菌液挑2-3环涂在左边制成薄的涂面，将大肠杆菌的浓菌液取2-3环涂在右边制成薄涂面。亦可直接在载玻片上制薄的涂面，注意取菌不要太多。
第九页，讲稿共二十页哦
第十页，讲稿共二十页哦
（2）晾干 让涂片自然晾干或者在酒精灯火焰上方文
火烘干。
（3）固定 手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰2-3
次固定（以不烫手为宜）。
（4）染色 将固定过的涂片放在废液缸上的搁架上，
加沙黄染色1-2min。
（5）水洗 用水洗去涂片上的染色液。
（6）干燥 将洗过的涂片放在空气中晾干或用吸水纸
吸干。
（7）镜检 先低倍观察，再高倍观察，并找出适当的
视野后，将高倍镜转出，在涂片上加香柏
油一滴，将油镜头浸入油滴中仔细调焦观
察细菌的形态。
第十一页，讲稿共二十页哦
涂片
干燥
固定
染色
水洗
镜检
简单染色方法
干燥
第十二页，讲稿共二十页哦
2、革兰氏染色
（1）涂片  与简单染色涂片相同；
（2）晾干  与简单染色法相同；
（3）固定  与简单染色法相同；
（4）初染  将玻片置于废液缸玻片搁架上，加适量（以盖满细菌涂面）的结