文档介绍：一种简单快速植物组织冰冻切片方法
( ) 热带亚热带植物学报 2008, 16 4: 386,389
Jou rna l of Trop ica l and Sub trop ica l Bo tany
一种简单快速植物组织冰冻切损伤细胞的内膜系统 , 影响其在植物细胞学研究
中的应用。为了解决上述***冻切片中存在的易操作的技术 , 可以缩短常规石蜡切片缓慢而复
问题 , 本文采用直接包埋冷冻和适当回温相结合杂的处理过程 , 减少对样品组织结构的损伤。在
的方法 , 取得了较好的切片效果。细胞免疫化学和原位杂交等研究中 , 冰冻切片能
更好地保存细胞内生物分子的活性 , 显示出独特 1 材料和方法作用。冰冻切片技术在动物和人体的组织研究中
[ 1- 3 ] 1. 1 材料已广泛应用 , 但由于植物细胞含水量大 , 在低
实验材料选取南京林业大学校园苗圃内南林 95温冰冻过程中容易形成冰晶 , 硬度变大 , 难以切出
( ) 杨 Pop u lu s ×eu ram e ricana‘N an lin95π1 a生茎。结构完整的组织切片 , 而且细胞内产生的冰晶会
收稿日期 : 2007 - 08 - 13 接受日期 : 2007 - 11 - 23
( ) ()基金项目 : 国家自然科学基金项目 30671657 ; 江苏省自然科学基金项目 B K2005132 资助 3 通讯作者 Co rre spond ing au tho r
1. 2 植物材料的冰冻处理方法埋剂 , 切片即刻附着在解剖针上 , 随后用解剖
直接包埋法启动切片机降温开关 , 使箱温切片转移到机箱外的载玻片上展片。
染色, 一般不需待切片完全展开时降低并维持在 - 20?, 冰冻台的温度降低到 - 20?。
殊处理就可以直接在切片上进行染色或组织将经过预处理的材料包埋 , 然后转入冰冻切片机内
分析。如图版 ?: 1 所示 , 杨树茎横切面结的样品台上 , 使材料迅速冷却并固着在样品台上。整 , 未出现细胞结构破损的现象。图版 ?: 2 液氮冷冻法液氮冷冻法是将材料经常规杨树茎细胞壁自发荧光的冰冻切片图像 , 杨方法固定和清洗后 , 先用包埋剂包裹在适当大小导管、木纤维细胞、韧皮纤维细胞及髓部薄壁的盒内 , 再用液氮迅速冷冻。冷冻时间约为 20 s, 结构清晰。
随后尽快将样品移至冰冻切片机腔内 , 样品经 1 h
左右的回温后再用包埋剂粘在样品台上进行冰冻 2 结果切片。
在电镜下观察不经过冷冻处理、液氮冷冻 1. 3 电镜制样观察和直接冷冻包埋的杨树 1 a 生茎薄壁细胞的
结构 , 结果表明不经过冷冻处理的杨树茎薄将直接包埋和液氮冷冻的材料回温后分别进
胞结构完整 , 可以观察到细胞内清晰的液泡膜行常规电镜制样 , 超薄切片机切片 , 醋酸双氧铀和及细胞核、线粒体、质体、内质网等细胞器的膜柠檬酸铅染色 , H 2600型透射电镜观察拍照。() 图版 ?: 3 。
1. 4 冰冻切片的制作流程液氮冷冻处理后的杨树茎薄壁细胞的超
构显示内膜系统损伤较为严重 , 由图版 ?: 5 样品固定