文档介绍：第4章 盐析法
知识点：盐析法，等电点沉淀法，有机溶剂 沉淀法，选择性变性沉淀法，金属离子沉淀法。
重点：上述几种沉淀方法的概念、原理及其适用范围；盐析法的影响因素对沉淀效果的影响，并能根据实际情况予以灵活应用和选择。
难点：常用沉淀第4章 盐析法
知识点：盐析法，等电点沉淀法，有机溶剂 沉淀法，选择性变性沉淀法，金属离子沉淀法。
重点：上述几种沉淀方法的概念、原理及其适用范围；盐析法的影响因素对沉淀效果的影响，并能根据实际情况予以灵活应用和选择。
难点：常用沉淀方法的灵活运用。
精选ppt
沉淀定义
沉淀特点
应用范围
沉淀分类
1. 沉淀法概述
精选ppt
盐析法
有机溶剂沉淀法
选择性变性沉淀法
等电点沉淀法
离子型聚合物沉淀法
聚电解质沉淀法
高价金属离子沉淀法
沉淀法分类
精选ppt
活性蛋白
非活性蛋白
理化性质
溶解度
提取方法
蛋白质的理化性质的回顾
精选ppt
盐析沉淀步骤
加沉淀剂方式
陈化条件
脱盐处理
2. 盐析沉淀
精选ppt
盐析机理示意图
精选ppt
精选ppt
精选ppt
①盐离子与蛋白质分子争夺水分子，降低了用于溶解蛋白质的有效水量，减弱了蛋白质的水合程度，破坏了蛋白表面的水化膜，导致蛋白质溶解度下降；
②盐离子电荷的中和作用，使蛋白质溶解度下降；
③盐离子引起原本在蛋白质分子周围有序排列的水分子的极化，使水活度降低。
盐析的机理
精选ppt
Cohn方程式logS=β-KsI
Ks盐析
β盐析
二次盐析
盐析沉淀基础
精选ppt
图1 碳氧血红蛋白的溶解度与硫酸铵离子强度的关系图
精选ppt
不同蛋白质的溶解度曲线
精选ppt
蛋白质的盐析分布曲线
精选ppt
溶解度曲线(a)和盐析分布曲线(b)
精选ppt
对β影响
对Ks影响
盐种类
盐浓度
温度
pH值
盐析影响因素
精选ppt
无机盐种类的影响
图7 不同盐溶液中碳氧血红蛋白的溶解度与离子强度的关系（25℃） (○)NaCl; (▼)KCl; (◘)MgSO4; (▲)NH4)SO4; (●)Na2SO4; (□)K2SO4; (■)柠檬酸三钠
精选ppt
温度的影响
精选ppt
pH对β的影响
精选ppt
蛋白质起始浓度的影响
精选ppt
二次盐析
精选ppt
盐析操作
精选ppt
3 等电点沉淀实例
①从猪胰脏中提取胰蛋白酶原：胰蛋白酶原的pI＝，可先于pH ，除去共存的许多酸性蛋白质(pI=3．O)。工业生产胰岛素(pI＝)时，，(同时加入一定浓度的有机溶剂以提高沉淀效果)。
②碱性磷酸酯酶的pI沉淀提取：发酵液调pH ，离心收集沉淀物。用pH mol/L Tris-HCl缓冲液重新溶解，加入20～40%饱和度的硫酸铵分级，离心收集的沉淀Tris-HCl缓冲液再次沉淀，即得较纯的碱性磷酸酯酶。
精选ppt
4 有机溶剂沉淀原理图
精选ppt
有机溶剂沉淀实例
精选ppt
mol/L磷酸氢二钠溶液，37℃水浴保温2 h，室温搅拌3 h，离心收集上清液，升温至55℃，保温20 min后迅速冷却离心去除热变性蛋白，上清液中多为热稳定性较高的醇脱氢酶。
5 选择性热变性沉淀实例
精选ppt
（1）非离子型聚合物沉淀法
（2）聚电解质沉淀法
（3）金属离子沉淀法
（4）亲和沉淀
6 其他沉淀法
精选ppt
凝聚技术
絮凝技术
7 凝聚和絮凝技术
精选ppt
第五章 沉淀法课后练习
名词解释：
盐析法，有机溶剂沉淀法，选择性变性沉淀法，等电点沉淀法，盐溶，盐析，β盐析，Ks盐析，二次盐析
盐析的机理
有机溶剂沉淀的机理
二次盐析如何实现？
精选ppt