文档介绍：病原学免疫学及生化检测
*
病原学、免疫学与生化检测
*
微生物是存在于自然界中的一群体形细小、结构简单、肉眼直接看不见、必须借助光学显微镜或电子显微镜放大几百倍、几千倍甚至几万倍才能观察到的微小生物。
*
；称革兰氏阴性菌（红阴G -）
*
*
五、细菌的培养和分离
大多数细菌可以用人工方法培养，但必须根据不同细菌采取各自适宜的条件，如无菌技术、接种和分离方法、培养基和培养条件等
1、样品处理
标本采集是否符合要求，直接影响细菌的检测结果，因此要求除粪、痰、咽拭子等标本，其他样本均应以无菌技术采集。
标本盛于无菌容器内，根据目的菌的种类采用不同的方法采集，标本采集后与时冷藏送检。
*
2、无菌技术
，为达到此目的而采取的技术就是无菌技术或无菌操作，在进行细菌培养检查过程中，无论是标本采集或培养操作，均需严格执行无菌操作技术。
、培养基等必须严格灭菌，使用过程中不得与未经消毒物品接触，忌长时间暴露于空气手中，有盖的应迅速盖上。
、玻璃等在打开盖后与关闭前，口部应在火焰上通过1-2次，以杀灭可能从空气中落入的杂菌；接种环或接种针每次使用前后，均应在火焰上烧灼灭菌，金属棒或玻璃棒部分亦须转动通过火焰3次。
*
、接种罩或生物安全柜内进行。
，也勿用口吹以防其他杂菌混入培养物中。
，应将塞子上端夹持于手指间适当位置，不得将棉塞任意放置别处。
*
3、接种、分离与结果观察
接种细菌应用接种环（针）来蘸取细菌标本，进行接种，其程序可分为：灭菌接种环 冷却 蘸取细菌标本 进行接种 接种环灭菌5个程序。
*
细菌的接种与分离技术
平板分区划线法
每划完一区，要将接种环灭菌
2 斜面接种法--常用于双糖管接种
3 液体接种法--糖类微量生化管
4 穿刺法 -----常用于半固体接种
5 倾注平板法--自来水细菌计数
6 涂布接种法--纸片法药敏试验
*
*
*
*
六、生化反应
1、各种细菌具有各自独特的酶系统，因而在代谢过程中所产生的分解和合成的代谢产物也不同，这些分解或合成代谢产物又各有不同的生化特点，利用此生化特点来检查代谢产物以鉴别细菌的方法，称为生化反应。
2、生化反应主要分为糖类的代谢试验、蛋白质和氨基酸的代谢试验、有机酸盐和铵盐的利用试验、呼吸酶类试验与其他酶类试验。
*
糖、醇、苷发酵试验
糖
细菌→
生长分解糖
产酸PH↓
*
不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。可用指示剂与发酵管检验。
*
淀粉水解试验
某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。
*
O/F（葡萄糖）试验
细菌分解葡萄糖时利用分子氧—氧化型(O)
无氧降解—发酵型(F)
不分解葡萄糖—产碱型(-)
一管加石腊油
F
O
碱
*
ONPG试验
邻-硝基酚＋β-半乳糖（黄色 ）
β-半乳糖苷酶
细菌＋邻-硝基-半乳糖
阳性-黄色
阴性对照-无色
*
本试验可同时观察乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产气（变黄）；产生硫化氢（变黑）。葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。
为分解
葡萄糖，不分解乳糖
为分解
葡萄糖、乳糖
为非发
酵菌
H2S
*
沙门氏菌的TSI试验
*
VP、MR试验
葡萄糖
丙酮酸
乙酰甲醇→二乙酰＋胍基→红色 VP阳性
肺炎克雷伯菌
甲酸、乙酸PH↓＋甲基红试剂→红色 MR阳性
大肠埃希菌
VP
MR
阳
阴
阳
对
*
V-P试验
某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白