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毛细管电泳和毛细管电色谱.ppt

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毛细管电泳和毛细管电色谱.ppt

上传人:文库新人 2022/3/31 文件大小:3.94 MB

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文档介绍

文档介绍:关于毛细管电泳和毛细管电色谱
第一页,讲稿共三十八页哦
毛细管电泳(capillary electrophoresis;CE)是一类以高压直流电场为驱动力,毛细管为分离通道,依据样品中各组分之间淌度和分配行为的差异而实现分离的新中。进样量可以通过控制驱动力的大小或时间长短来控制。CE进样技术均适用于CEC。
目前有三种方法可以让样品直接进入毛细管:
电动法、压力法和浓差扩散法。
第十三页,讲稿共三十八页哦
. 电源及其回路
电流回路系统包括高压电源、电极、电极槽、导线和电解质缓冲溶液等。CE和CEC一般采用0 ~ ±30 kV连续可调的直流高压电源。理想的电源应具备:
(一端接地);
、电流、功率输出模式任意可选;
、电流或电功率的梯度;
%。
~l mm的铂丝制成。
电极槽,即缓冲液瓶,通常是带螺口的小玻璃瓶或塑料瓶(1~5mL不等),要便于密封。缓冲液内含电解质,充于电极槽和毛细管中,通过电极、导线与电源连通,一同构成整个电流回路。
第十四页,讲稿共三十八页哦
. 毛细管及其温度控制
熔融石英毛细管在CE中应用最广泛,熔融石英拉制得到的毛细管很脆,易折断,一般在外表面涂有聚酰亚***保护层,使之变得富有弹性,不易折断。
内径越小,表面积/体积比越大,散热效果越好。内径小,样品负载小,检测、进样、清洗等操作困难。
一般使用的毛细管柱内径在25 ~100 μm之间,目前最常用的是50μm和75μm两种。
检测窗口部位的外涂层剥离。
焦耳热效应产生径向温度梯度,还会导致分离重现性差。商品仪器大多有温度控制系统,主要采用风冷和液冷两种方式。
一般采用物理吸附或化学键合两种方式形成毛细管内壁涂层,对石英毛细管进行改性或修饰,可有效控制电渗流、抑制吸附进而优化分离。
第十五页,讲稿共三十八页哦
. 检测系统
第十六页,讲稿共三十八页哦
. 检测系统
第十七页,讲稿共三十八页哦
. 毛细管电泳分离模式及应用
. 毛细管区带电泳(capillary zone electrophoresis; CZE)
. 基本操作条件
毛细管区带电泳也称为毛细管自由溶液区带电泳,是毛细管电泳最基本、也是应用最广的一种操作模式。其分离原理是基于样品组分荷质比的差异。
需要控制的操作变量主要是电压、缓冲液浓度、pH值和添加剂等。
缓冲液的选择通常须遵循下述要求:
1.在所选择的pH范围内有合适的缓冲容量。
2.本底检测响应低。
3.自身的淌度低,即离子大而荷电小。
第十八页,讲稿共三十八页哦
. 毛细管区带电泳(CZE)
在CZE分离中,除了背景电解质外,常常还在缓冲溶液中加入某些添加剂:

2. 表面活性剂
3. 手性添加剂
对于许多水难溶的样品,如果在缓冲液中加入少量的有机溶剂,常常能有效改善分离度。在极端情况下,可完全使用有机溶剂,或以有机溶剂为主体,这就是非水毛细管电泳技术。
图21-6 电渗流反向示意图
第十九页,讲稿共三十八页哦
. 毛细管区带电泳(CZE)
. 应用
毛细管区带电泳特别适合分离带电化合物,包括无机阴离子、无机阳离子、有机酸、***类化合物、氨基酸、蛋白质等,不能分离中性化合物。
毛细管区带电泳3分钟内分离30种阴离子电泳图
第二十页,讲稿共三十八页哦
. 胶束电动毛细管色谱(MEKC)
MEKC是在电泳缓冲溶液中加入表面活性剂,当溶液中表面活性剂浓度超过临界胶束浓度时,表面活性剂分子之间的疏水基团聚集在一起形成胶束,成为分离体系的准固定相,溶质基于在水相和胶束相之间的分配系数不同而得到分离。
第二十一页,讲稿共三十八页哦
. 胶束电动毛细管色谱(MEKC)
MEKC是在电泳缓冲溶液中加入表面活性剂,当溶液中表面活性剂浓度超过临界胶束浓度时,表面活性剂分子之间的疏水基团聚集在一起形成胶束,成为分离体系的准固定相,溶质基于在水相和胶束相之间的分配系数不同而得到分离。
电泳流和电渗流的方向相反,且ν电渗流 > ν电泳 ,负电胶束以较慢的速度向负极移动;
可用来分离中性