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液相色谱仪使用方法.ppt

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液相色谱仪使用方法.ppt

上传人:卓小妹 2022/3/31 文件大小:2.26 MB

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液相色谱仪使用方法.ppt

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文档介绍

文档介绍:关于液相色谱仪使用方法
第一页,讲稿共二十一页哦
一、什么是色谱
色谱是一种分离工具,而不是传统意义上的分析仪器。
色谱法也叫层析法,它是一种高效能的物理分离技术,将它用于分析化学并配合适当的检测手段,就成为色谱分析法。
常定液,采用疏水性流动相,即流动相的极性小于固定液的极性(正相 normal phase),反之,流动相的极性大于固定液的极性(反相 reverse phase)。正相与反相的出峰顺序相反;
固定相:早期涂渍固定液,固定液流失,较少采用;
化学键合固定相:将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶(担体)表面的游离羟基上。C18柱(反相柱)以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。
第八页,讲稿共二十一页哦
反相高效液相色谱法
即指流动相的极性大于固定相极性的色谱方法。
在本法中常采用化学键合相作为固定相,流动相采用水—甲醇或水—乙腈系统,在反相色谱中,极性强的组分在分离时先流出柱子,极性弱的组分后流出。因此适合于共存组分极性差异较大的样品分析。
第九页,讲稿共二十一页哦
乙腈(jīng)
乙腈又名甲基氰,分子式CH3CN,无色透明液体,密度小于水,,能与水和乙醇等有机溶剂以任意比混溶,易燃,有毒性。
第十页,讲稿共二十一页哦
2、液-固吸附色谱
基本原理:各组分在固定相吸附剂上竞争性吸附与解吸
固定相:固体吸附剂为硅胶、氧化铝等,较常使用的是5~10μm的硅胶吸附剂;
流动相:各种不同极性的一元或多元溶剂。
特点:适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样,对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性;
缺点:非线形等温吸附,常引起峰的拖尾
第十一页,讲稿共二十一页哦
六、色谱柱
液相色谱柱的分离作用是在填料与流动相之间进行的,柱子的分类是依据填料类型而定。
正相柱:多以硅胶为柱填料。根据外型可分为无定型和球型两种,其颗粒直径在3--CN,-NH2等官能团即所谓的键合相硅胶。
反相柱:主要是以硅胶为基质,在其表面键合十八烷基官能团(ODS)的(C18)非极性填料。也有无定型和球型之分。常用的其他的反相填料还有键合C8、C4、C2、苯基等,其颗粒粒径在3—10 μm之间。
第十二页,讲稿共二十一页哦
1. 色谱柱的选择
第十三页,讲稿共二十一页哦
2. 本公司使用的柱子
主要特点:
使用过程中柱压稳定,即使长时间使用也不会出现拖尾等异常情况
使用寿命长,清洗频度低,仅为同类产品的15%
第十四页,讲稿共二十一页哦
七、样品的前处理
a、最好使用流动相溶解样品。
b、使用予处理柱除去样品中的强极性或与 柱填料产生不可逆吸附的杂质。
c、 质。
d、利用超声仪脱气。
第十五页,讲稿共二十一页哦
八、流动相的配制
a、流动相对样品具有一定的溶解能力,保证样品组分不会沉淀在柱中 。
b、流动相具有一定惰性,与样品不产生化学反应。
c、流动相的黏度要尽量小,以便得到好的分离效 果;同时降低柱压,延长液体泵的使用寿命
d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
e、流动相沸点不要太低,否则容易产生气泡。
f、在流动相配制好后, μm滤膜过滤,并进行脱气。
第十六页,讲稿共二十一页哦
九、流动相流速的选择
因柱效是柱中流动相线性流速的函数,使用不同的流速可得到不同的柱效。,流速一般选择1ml/min,,/min为佳。
当选用最佳流速时,分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时,可适当增加甲醇或乙腈的含量)。
第十七页,讲稿共二十一页哦
十、检测过程的操作
样品检测前控制平台的准备工作
样品检测时的操作
请单击
请单击
请单击
第十八页,讲稿共二十一页哦
十一、HPLC常用操作步骤
1)首先对流动相进行过滤,。
2)对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3)正常情况下,先用甲醇冲洗10-20分钟,然后再进入测试用流动相。
4)一般情况下,流动相冲洗20-30分钟后,仪器和基线稳定,方可进样测试。
5)同时进两针标样,-,可正式进样。
6) 测试结束,要进行色谱仪及色谱柱的清洗和维护。如流动相为缓冲试剂,要用重蒸水清洗10-20分钟,方可用有机相进行保护,否则,有损色谱柱。
7)关机时,先关计算机,再关液相色谱。
第十九页,讲稿共二十一页哦
注意事项:
1) 流动相均需色谱纯度,水用2

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