文档介绍：蛋白质的性质实验〔二〕
蛋白质的等电点测定和沉淀反应
一、蛋白质等电点的测定
1．目的
〔1〕了解蛋白质的***解离性质。
〔2〕学****测定蛋白质等电点的一种方法。
2．原理
蛋白质是***电解质。在蛋白质溶液中存在以下平衡：
蛋蛋白质的性质实验〔二〕
蛋白质的等电点测定和沉淀反应
一、蛋白质等电点的测定
1．目的
〔1〕了解蛋白质的***解离性质。
〔2〕学****测定蛋白质等电点的一种方法。
2．原理
蛋白质是***电解质。在蛋白质溶液中存在以下平衡：
蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱度影响。当溶液的pH到达一定数值时，蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，在电场中，蛋白质既不向阴极移动，也不向阳极移动，此时溶液的pH值称为此种蛋白质的等电点。不同蛋白质各有其特异的等电点。在等电点时，蛋白质的理化性质都有变化，可利用此种性质的变化测定各种蛋白质的等电点。最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pH值。
本实验借观察在不同pH溶液中的溶解度以测定酪蛋白的等电点。用醋酸与醋酸钠〔醋酸钠混合在酪蛋白溶液中〕配制成各种不同pH值的缓冲液。向诸缓冲溶液中加入酪蛋白后，沉淀出现最多的缓冲液的pH值即为酪蛋白的等电点。
3．器材
4．试剂1〕％酪蛋白醋酸钠溶液200mL
取酪蛋白，加少量水在乳钵中仔细地研磨，将所得的蛋白质悬胶液移入200mL锥形瓶内，用少量40〜50°C的温水洗涤乳钵，将洗涤液也移入锥形瓶内。加入10mL1mol/L醋酸钠溶液。把锥形瓶放到50C水浴中，并小心地旋转锥形瓶，直到酪蛋白完全溶解为止。将锥形瓶内的溶液全部移至100mL容量瓶内，加水至刻
度，塞紧玻塞，混匀。
5．操作1〕取同样规格的试管4支，按下表顺序分别精确地加入各试剂，然后混匀
试管号
L酯釀
1JOW^:L酣醉
(mL)
CmL)
(mL)
(mL3
1
06
—
—
2
—
—
3
go
—
10
—
4
74
—
—
16
〔2〕向以上试管中各加酪蛋白的醋酸钠溶液1mL加一管，摇匀一管。此时1、2、3、4管的pH依次为、、、。观察其混浊度。静置10分钟后，再观察其混浊度。最混浊的一管的pH即为酪蛋白的等电点。
、蛋白质的沉淀及变性
1•目的
〔1〕加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。
〔2〕了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义
〔3〕了解蛋白质变性与沉淀的关系
2•原理
在水溶液中的蛋白质分子由于外表生成水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。
蛋白质的沉淀反应可分为两类。
〔1〕可逆的沉淀反应此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解于原来的溶剂中，并保持其天然性质而不变性如大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇〔或***〕短时间作用于蛋白质。提纯蛋白质时，常利用此类反应。
〔2〕不可逆沉淀反应此时蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋白质常变性而沉淀，不再溶于原来溶剂中。加热引起的蛋白质沉淀与凝固，蛋白质与重金属离子或某些有机酸的反应都属于此类。
蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在〔如电荷〕，并不析