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【最新】PCR基因扩增实验室的规范化设置.docx

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文档介绍

文档介绍:PCR基因扩增实验室的标准化设置
of accountability, redress of orders and prohibitions. Strengthening the honesty and self-disc个本区的实验操作过程中,操作者必须戴手套,并经常更换。此外,操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施。 严禁用嘴吸取液体,加样器和吸头等必须经高压处理。
  工作结束后必须立即对工作区进行清洁。本工作区的实验台外表应可耐受诸如次***酸钠的化学物质的消毒清洁作用。实验台外表的紫外照射应方便有效。由于紫外照射的距离和能量对去污染的效果非常关键,因此可使用可移动紫外灯〔254nm波长〕,在工作完成后调至实验台上60~90cm内照射。由于扩增产物仅几百bp,对紫外线损伤不敏感,因此紫外照射扩增片段必须延长照射时间,最好是照射过夜。实验室及其设备的使用必须有日常记录。
  〔二〕标本制备区
  下述操作在该区进行:临床标本的保存,核酸〔RNA、DNA〕提取、贮存及其参加至扩增反响管和测定RNA时cDNA的合成。 要正确使用加样器。由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染,所以应防止在本区内不必要的走动。可通过在本区内设立正压条件防止从邻近区进入本区的气溶胶污染。为防止样本间的交叉污染,参加待测核酸后,必须盖好含反响混合液的反响管。对具有潜在传染危险性的材料,必须有明确的样本处理和灭活程序。 用过的加样器吸头必须放入专门的消毒〔例如含次***酸钠溶液〕容器内。实验室桌椅外表每次工作后都要清洁,实验材料〔原始血标本、血清标本、提取中的标本与试剂的混合液等〕如出现外溅,那么必须分别处理并作出记录。 对实验台适当的紫外照射〔254nm波长,与工作台面近距离〕适合于灭活去污染。可移动紫外线管灯可用来确保工作后对实验台面的充分照射。 样本处理对核酸扩增有很大影响,必须使用有效的核酸提取方法,可在开展临床标本检测前对提取方法进行评价。 用于RNA扩增检测样本制备好以后,应立即进行cDNA合成,因为cDNA链较RNA稳定,保存相对容易。为保证逆转录反响的需要,应在标本制备区设置一个以上的温育装置。 cDNA合成的理想温度依所使用的酶而定,倾向于使用一步法:即使用在扩增反响缓冲液条件下具有逆转录活性的热稳定的DNA聚合酶进行逆转录,其较cDNA合成后再开盖以调节缓冲液或参加聚合酶进行扩增发生污染的可能性降低。 待测RNA的cDNA拷贝须保存在标本制备区,不得在本区对样本进行PCR扩增。
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