文档介绍：分析化学课件1
弱极性组分先出柱,强极性组分后出柱
5．出柱顺序（硅胶柱）
二、液液分配色谱法（LLC）
1．分离机制：
利用组分在两相中溶解度的差异
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正相色谱法— 固定液极性 > 流动相极性
键合相：
醚基和二羟基等键合相
用于反相或正相色谱
：
常用氨基﹑氰基键合硅胶(氨基柱、氰基柱）
一般用于正相色谱
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（1）使用过程中不流失；
（2）化学稳定性好；
（3）适于梯度洗脱；
（3）载样量大
（二）键合相的特点
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二、化学键合相色谱法的流动相 （自学）
对流动相的要求：
与固定相不发生化学反应。
对试样有适宜的溶解度。使k在1~10范围内，
与检测器相适应。
纯度高，粘度小。低粘度流动相如甲醇﹑乙腈等可以降低柱压，提高柱效。
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三、分离条件的选择
（一）HPLC中的速率理论
A=2λdp
球形、小粒度、均匀（RSD＜5%）固定相，匀浆高压填充，以降低A。
B=2γDm 可以忽略。
因为Dl很小，室温操作，且U大于U最佳，
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固定相传质阻抗CS可以忽略 ，因df极小
流动相传质阻抗Cm
静态流动相传质阻抗系数Csm由于部分流动相在固定相微孔内的滞留
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原因：化学键合相，液体流动相
结果：HPLC的实验条件应该是：①小粒度、均匀的球形化学键合相；②低粘度流动相，流速不宜过快；③柱温适当。
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（二）影响分离的因素
n由色谱柱（固定相）性能决定，
α主要受溶剂种类的影响，
k受溶剂配比的影响。
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(三)HPLC法分离条件的选择
1. 固定相与装柱方法的选择：
选粒径小的、分布均匀的球形固定相（dp≤10μm）
2. 流动相及其流速的选择：
选粘度小（降低柱压）、对样品有较好溶解能力 与检测器匹配
低流速（～ ）
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3. 柱温的选择：
选室温25℃左右
4．洗脱方式 :
等度洗脱、梯度洗脱
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第三节 高效液相色谱仪
组成
输液系统
进样系统
色谱柱系统
检测系统
数据记录处理系统
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一、输液系统
恒流泵：在输送流动相过程中流量恒定。常用柱塞往复泵
：为了克服流量的脉动。
有串联式和并联式
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(二)输液泵应具备的性能：
，耐腐蚀
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(三)输液泵操作注意事项：
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二、分离和进样系统
(一)进样器
进样阀
（六通阀）
自动进样装置
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(二)色谱柱（column）
:由柱管和固定相组成
:分析柱、制备柱
:
H、n、fs、k和α的重复性或R。
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三、检测系统
（一）检测器(detector)的主要性能
：
(1)灵敏度（sensitivity）高（检测限低）
(2)噪音（noise）低
(3)线性范围（linear range）宽
(4)重复性（repeatability）好
(5)适用范围广（通用型、专属型）
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（二）紫外检测器(ultraviolet detector)
：
朗伯－比尔 (Lambert-Beer) 定律，响应信号（吸光度）与浓度成正比A=εCl
：
灵敏度较高（10-6—10-9 g/ml），噪音低，线性范围宽，稳定性好，适于梯度，不破坏样品，应用广（分析、制备）。
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：
只能检测有紫外吸收的物质，流动相的截止波长应小于检测波长。
、浓度型检测器
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(1)固定波长检测器 ：254nm
(2)可变波长检测器：
光源：氘灯（和钨灯）， 200—400（800）nm，单色器，流通池（试样），光电管
光路系统和紫外分光光度计相似
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(3)光电二极管阵列检测器 (photodiode array detector； PDAD)：
一系列光电二极管，一个二极管对应接受光谱上约1nm谱带宽的单色光
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紫外检测器
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第四节 高效液相色谱分析方法
定性分析方法
定量分析方法：
外标法、内标法
同GC（自己看）
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