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荧光定量核酸检测技术.ppt

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荧光定量核酸检测技术.ppt

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荧光定量核酸检测技术.ppt

文档介绍

文档介绍:关于荧光定量核酸检测技术
第一页,讲稿共三十六页哦
主要表现为PCR产物分析手段落后:
琼脂糖凝胶电泳法只能判断产物片段大小,并不能鉴别产物特异性。造成传统PCR检测缺点非特异性难以判断、假阳性多和重复验室用进行PCR扩增和PCR扩增产物的各类分析操作。
基本设备:;;
、电泳槽、紫外分析仪;;5. 台式小型高速离心机、孵育箱(水浴或恒温);
6. 冰箱(4℃、-20℃);7. 微波炉;8. 配套移液器(若干);9. 高压灭菌的各种Eppendorf管和移液器吸嘴。
10. 电脑和专用文具用品、救护药箱;11. 实验桌椅(实验台台面防酸、防碱和耐热);12. 自来水设备;
:根据检测方法不同而定。
第十五页,讲稿共三十六页哦
定量技术比较
第十六页,讲稿共三十六页哦
第十七页,讲稿共三十六页哦
试剂盒的检测灵敏度
第十八页,讲稿共三十六页哦
荧光定量PCR试剂盒检测HBV-DNA结果 与临床的关系
第十九页,讲稿共三十六页哦
经统计,X2=,P<,表明在HBsAg/HBeAg/抗HBc阳性和HBsAg/抗HBe/抗HBc阳性组中病毒载量的差异显著,HBV DNA 和HBeAg密切相关。该定量结果能够反映在这两种血清学模式中病毒DNA的复制情况,对于临床辅助诊断有重要作用。
表. 在HBsAg/HBeAg/抗HBc阳性和HBsAg/抗HBe/抗HBc阳性组中病毒载量频数分布
第二十页,讲稿共三十六页哦
慢性肝炎患者干扰能治疗过程中病毒核酸 的动态变化 上海第二医科大学附属瑞金医院传染科(200025) 罗振辉 厉惠莉 高健 张东华
摘要:本文采用探针杂交定量检测HBV-DNA,动态检测了15例慢性乙肝患者干扰能治疗前、后和治疗过程中的HBV-DNA的变化,除见干扰能抑制病毒复制的作用外,且HBV-DNA的变化较eAg阴转和ALT下降更敏感、更确切的反映了干扰能的疗效。
干扰能疗效的个体差异甚大,似和机体感染的严重程度及自身的清除能力有关,HBV-DNA的动态检测,结合eAg和ALT的变化,可有助于决定适当的剂量和合理的疗程。
第二十一页,讲稿共三十六页哦
部分讨论:
15例病人中eAg均为阳性,但HBV-DNA值的差异甚大, 到4800 Meq/ml,该值更确切的反映了机体的感染状态,其高低可能与感染的严重程度及病毒复制的活跃情况呈正相关;与机体免疫清除的时间和强度呈负相关。高值示感染严重或清除无力;反之表示感染较轻或清除强力。
实验表明HBV-DNA低值者疗效较佳;
无论HBV-DNA值是高是低,治疗后HBV-DNA均见一定程度下降,其下降的幅度与病例的选择;
eAg的阴转率6个月时为8/15,和国内外诸多报告大致相似,此变化和HBV-DNA值的低下基本吻合,但HBV- Meq/ml,且见HBV-DNA的变化大多早于eAg的阴转,一般提早2个月,个别提前4个月,可见HBV-DNA值的检测远较观察eAg更敏感、更确切的反映了干扰能抗病毒的作用。
第二十二页,讲稿共三十六页哦
ALT的变化通常也是评估干扰能治疗的重要指标,本组病例6个月时ALT下降至正常者为11/15(%),无明显变化或升高者为4/15,此变化和HBeAg的阴转大致吻合,但和HBV-DNA 低下并非完全一致。2号病例持续用药至8个月时ALT明显升高,继续减量用药后,HBV-DNA低下,有力的说明了ALT升高是机体清除病毒的正常表现,故以ALT复常为评估指标应有辨证的观点。
结论:
HBV-DNA值的变化充分反映了干扰能抑制病毒复制的作用明显,且HBV-DNA的变化较eAg阴转和ALT下降更敏感、更确切的反映了干扰能的疗效。
对于每一病例应具体分析,力争以HBV-DNA值作为观察疗效的指标,决定适当的剂量,反复或更长的疗程,也许是未来抗病毒治疗的方向。
第二十三页,讲稿共三十六页哦
对HBV抗病毒治疗的定量检测建议
针对拉米夫定治疗乙型肝炎的定量检测建议
针对干扰素治疗乙型肝炎的定量检测建议
可以研究联合用药,并用定量检测来评估疗效
第二十四页,讲稿共三十六页哦
针对拉米夫定治疗乙型肝炎的定量检测建议
根据《拉米夫定临床应用指导意见》(由“拉米夫定临床应用专家指导小组”制定),我们提出了以下对乙型肝炎病人的定量检测建议:
病人的选择:HBV DNA 定量检测;
观察项目及随访:
血清病毒学标志:HBeAg,抗HBe,HBV DNA,
治疗目标和疗效判断:
病毒学标志改善:HBV-DNA阴转(斑