文档介绍：关于蛋白质的分离提取方法
第一页，讲稿共三十页哦
一、凝胶色谱法（分配色谱法）
根据被分离物质的蛋白质相对分子质量的大小，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来进行分离。
大多数凝胶是由多糖类化合物（如葡聚糖或琼脂糖）定未知蛋白质的分子量。市场上有高分子量、次高分子量及低分子量的标准蛋白试剂出售。
第十页，讲稿共三十页哦
实践训练
，所用凝胶的化学本质是( )
—聚丙烯酰***凝胶电泳中决定蛋白质或多肽移动速度的主要因素是( )
C
A
第十一页，讲稿共三十页哦
，凝胶的种类较多，但其作用的共同点是( )
，从而影响蛋白质分子的移动速度
，从而影响其移动速度
，一定要加入缓冲液，其作用主要是( )
A
C
第十二页，讲稿共三十页哦
：
选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。
：
根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同种类的蛋白质。
四、实验操作——血红蛋白的提取和分离
第十三页，讲稿共三十页哦
水 分
固体物质
血液
血浆
血细
胞
白细胞
血小板
红细胞
（最多）
血红蛋白
两个α—肽链
两个β—肽链
四个亚铁红素基团
思考
血液有哪些成分？
血浆蛋白
无机盐
磷脂
葡萄糖等
第十四页，讲稿共三十页哦
血红蛋白的特点：
血红蛋白
两个α—肽链
两个β—肽链
四个亚铁红素基团
第十五页，讲稿共三十页哦
样品处理→粗分离→纯化→纯度鉴定
：
㈠.蛋白质提取和分离步骤
㈡.凝胶色谱法分离蛋白质操作步骤
思考：人们用鸡的红细胞提取DNA，用猪、牛、羊的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？
答：鸡的红细胞具有细胞核，含有DNA，便于进行DNA的提取，哺乳动物成熟的红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋白含量丰富便于提取血红蛋白。
第十六页，讲稿共三十页哦
①洗涤操作：
(1)红细胞的洗涤:
②洗涤目的:
去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化，洗涤次数不可过少。
柜式离心机
初次离心后的结果
3次洗涤后的结果
第十七页，讲稿共三十页哦
磁力搅拌器
搅拌器转子
搅拌器正在工作
(2)血红蛋白的释放（使用蒸馏水和甲苯）
第十八页，讲稿共三十页哦
(3)分离血红蛋白溶液：
甲苯层（无色透明）；
脂溶性物质沉淀层（白色薄层固体）；
血红蛋白的水溶液层（红色透明液体）；
杂质沉淀层（暗红色）。
过滤：除去脂溶性物质沉淀层和杂质沉淀层。
第十九页，讲稿共三十页哦
(4)透析(粗分离)：
①过程：取1ml的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有300ml的物质的量浓度为20mmol/l的磷酸缓冲液中（），透析12小时。
②透析目的：除去样品中分子量较小的杂质。
利用透析袋透析
第二十页，讲稿共三十页哦
透析过程动画演示
第二十一页，讲稿共三十页哦
:
⑴.凝胶色谱柱的制作：
注意事项：底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面，否则难以铺实尼龙网，还会导致液体残留，蛋白质分离不彻底。
第二十二页，讲稿共三十页哦
⑵.凝胶色谱柱的装填
①凝胶的选择：
②凝胶的前处理：
③凝胶色谱柱的装填方法：
注意：，以降低凝胶颗粒之间的空隙。 ：因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。
④洗涤平衡：装填完毕后，立即用缓冲液洗脱瓶，在50cm高的操作压下，用300ml的20mmol/l的磷酸缓冲液（）充分洗涤平衡12小时。
注意：，否则可能有气泡混入，影响液体在柱内的流动与最终生物大分子物质的分离效果。
，露出凝胶颗粒的现象。
50cm高
第二十三页，讲稿共三十页哦
装配好的凝胶柱
第二十四页，讲稿共三十