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血站核酸检测.ppt

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血站核酸检测.ppt

上传人:石角利妹 2022/4/1 文件大小:3.82 MB

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血站核酸检测.ppt

文档介绍

文档介绍:关于血站核酸检测
第一页,讲稿共六十二页哦
血站核酸检测的意义
核酸检测(NAT)可以 有效地缩短病毒特异抗原和抗体免疫测定的“窗口期”,从而减少输血风险,提高输血安全。
第二页,讲稿共六十二页哦
乙型肝炎病毒(H
第二十一页,讲稿共六十二页哦
理想的核酸扩增实验室设计B
第二十二页,讲稿共六十二页哦
核酸扩增检测实验室设计的一般原则
各区独立
注意风向
因地制宜
方便工作
第二十三页,讲稿共六十二页哦
关于“区域”合并
如使用扩增和产物分析同时完成的实时荧光PCR仪进行核酸扩增检测,扩增区和产物分析区可以合并。
如使用核酸提取、扩增及产物分析等均在一台仪器上完成的全自动核酸检测分析仪,标本制备区、扩增区和产物分析区可合并。
第二十四页,讲稿共六十二页哦
符合基本要求的核酸扩增检测实验室的条件
(1)试剂准备区、标本制备区和扩增及产物分析区等三个或四个区域在物理空间上,必须是完全相互独立的,各区域无论是在空间还是在使用中,应始终处于完全的分隔状态,不能有空气的直接相通。
(2)各区的可移动的仪器设备及各种物品包括实验记录本、记号笔、试管架及清洁用具等必须专用。
(3)应在标本制备区、扩增及产物分析区等相对有可能出现“污染物”的区域安装排风扇或其它排风和有效的装置,以使空气按试剂准备区标本制备区扩增(及产物分析)区方向流动。
第二十五页,讲稿共六十二页哦
核酸扩增实验室的工作流程
试剂准备区

标本制备区
扩增区及扩增产物分析区
第二十六页,讲稿共六十二页哦
试剂贮存准备区
核酸扩增实验室中最为“洁净”的区域,不应有任何核酸的存在,包括试剂中所带的标准品和阳性对照。
所有实验用洁净物品如离心管、吸头等的存放和准备处。
商品试剂盒
自制试剂:一次较大量配制,然后分装成小瓶保存,每次检测时,取出一小瓶使用,未用完的即弃掉,不再使用。
仪器设备主要有加样器、天平、离心机和冰箱等,最好配备超净工作台。
第二十七页,讲稿共六十二页哦
标本制备区
仪器设备主要有混样设备、核酸提取仪、生物安全柜、加样器、高速台式(冷冻)离心机、加热模块或水浴箱、冰箱等。生物安全柜不应放在实验室门口等易受人员走动影响的地方,也不应直对分体式空调。
主要是用于血液样本的混样、核酸样本的提取。
加样器吸头必须带滤芯。
使用加热模块时,如在模块孔中填入二氧化硅细砂,然后将标本管置于细砂中温育,可得到较为一致的温育温度。
第二十八页,讲稿共六十二页哦
扩增及产物分析区
扩增反应体系的配制和提取核酸的加入,可在标本制备区也可在本区内进行,关键是要防止产物的污染。如果空间允许的话,也可在一个独立的区域内进行。
加样时,先加提取的核酸模板样本,每加完一个即盖好盖子,然后加阳性质控核酸模板,再就是标本制备阴性质控和仅含按样本一样稀释的主反应混合液的扩增阴性质控,这样做的目的是,最大可能地测出以前扩增产物的交叉污染。
第二十九页,讲稿共六十二页哦
扩增及产物分析区
热循环仪的电源应专用,并配备一个不间断电源(UPS)或稳压电源。
每次扩增后,可使用可移动紫外灯对扩增热循环仪进行照射。
扩增仪应定期进行校准。
第三十页,讲稿共六十二页哦
第三十一页,讲稿共六十二页哦
工作流程
第三十二页,讲稿共六十二页哦
第三十三页,讲稿共六十二页哦
关注采集、保存、运输的关键点
留样方式、采血管
采血后什么时间离心
采血后保存温度、时间
离心后保存温度、时间(运输)
检测前的保存温度、时间
长期保存的样本
第三十四页,讲稿共六十二页哦
第一步:标本的采集-采血管
无菌真空采血管
一、血清管
普通血清管
带分离胶的血清管
二、抗凝管
EDTA 2K或3K抗凝管
EDTA 2K抗凝间分离胶(PPT)
枸橼酸钠抗凝管
……
第三十五页,讲稿共六十二页哦
第一步:标本的采集-留样方式
最佳方式:旁袋
1管 5ml用于核酸检测 2管 5ml用于酶免疫测定等 3管用于长期保存留样
旁路采样
1管 5ml用于核酸检测 2管 5ml用于酶免疫测定等 3管用于长期保存留样
小辫留样(不可取)
1管 5ml用于核酸检测 2管 5ml用于酶免疫测定等
第三十六页,讲稿共六十