文档介绍：结核分枝杆菌合群核酸检测试剂
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结核分枝杆菌复合群核酸检测试剂
注册技术审查指导原那么
本指导原那么旨在指导注册申请人对结核分枝杆菌复合群核酸检测试剂注册申报部
应着重从方法学、检验原理、最低检测限及被测靶核酸序列的特性等方面写明申报试
剂与目前市场上已获批准的同类产品之间的主要区别。假设被测物为新的靶核酸序列，
那么应详细论述作为检测靶标的核酸序列的临床意义，即其与临床应用〔可用于肺结
核辅助诊断〕的相关性，并提供充分的支持资料。
综述资料应符合?体外诊断试剂注册管理方法 ?〔国家食品药品监督管理总局令第 5 号，
以下简称?方法?〕和?关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式
的公告?〔国家食品药品监督管理总局公告2021 年第 44 号〕的相关要求。
〔二〕主要原材料的研究资料
应提供主要原材料如引物、探针、酶、阴性对照、阳性对照以及企业参考品等的选择
与来源、制备过程、质量分析和质量控制标准等的研究资料。假设主要原材料为企业
自己生产，其生产工艺必须相对稳定；如主要原材料购自其他供货商，应提供的资料
包括：供货商提供的质量标准、出厂检定报告或性能指标证书，以及该原材料到货后的质量检验资料。
申请人应提供企业参考品的详细制备过程，包括组成、来源、菌株特性〔如名称、种
属、靶核酸的拷贝数、浓度等〕等信息。企业参考品的工程应包括：阴性参考品、阳
性参考品、最低检测限参考品、重复性参考品等。阳性参考品应着重考虑结核分枝杆
菌复合群的代表菌株，阴性参考品那么主要涉及对分析特异性〔交叉反响〕的验证情
况。建议采用灭活的菌株建立企业参考品，不宜采用质粒、菌株的基因组提取/ 纯化
物等核酸或临床样本〔如痰液〕。
申报试剂的质控体系通过设置阳性、阴性、内对照〔内标〕等各种对照来实现，需考
虑对样本核酸提取/ 纯化、配液及加样、试剂及仪器性能、扩增反响抑制物〔管内抑
制〕、交叉污染、靶核酸降解等因素可能造成的假阴性或假阳性结果的质量控制。阳
性对照的核酸性质应与待测样本的核酸性质一致，如同为RNA^E DNA企业应对各种
对照的 Ct 值或相应判断数值做出明确的范围要求。申报资料应详细描述对照的原料
选择、制备、定值过程等试验资料。
本指导原那么的技术要求是基于荧光探针PCR方法建立的，对于采用该方法学的结核
核酸检测试剂，建议至少设置阳性对照、阴性对照和内对照。
1. 内对照〔内标〕
内对照可对实验过程可能存在的扩增反响抑制物、仪器、试剂和操作等所导致的假阴
性结果进行质量控制。内对照可采用不含靶核酸序列的质粒或线性 DNA非结核分枝杆菌复合群的病原体或克隆菌株，靶核酸为RNA寸可采用假病毒等。申请人应对内对
照〔内标〕的引物、探针和模板浓度做精确的验证，既要保证内标荧光通道呈明显的阳性曲线又要尽量降低对靶核酸序列检测造成的抑制而导致假阴性。
阳性对照可对实验过程进行质控。阳性对照可为：含有靶核酸序列的核酸、含有靶核
酸序列的结核分枝杆菌复合物菌株或其他克隆菌株，靶核酸为RNA时可采用假病毒等。
企业应对各种阳性对照的 Ct 值或相应判断数值做出明确的范围要求。
阴性对照对可能存在的交叉污染进行假阳性结果的质控。阴性对照可以是空白对照。
阴性对照需参与样本核酸的平行提取/ 纯化。
由于申报试剂所适用的临床样本比较复杂，其中可能含有各种影响PCR反响的抑制物,
从而影响后续试验结果，造成假阴性的可能性。因此，申报试剂应充分考虑对样本核
酸提取 / 纯化环节的质量控制，通过设置各种对照进行质控。比方，采用克隆菌株作
为内对照，或者采用菌株作为阳性对照并参与样本核酸的平行提取/ 纯化，或者设置
专门的核酸提取/纯化对照〔如菌株〕等，以对样本核酸提取/ 纯化的质量及效率进行
评估。
. 核酸提取 / 纯化组分〔如适用〕的主要组成、原理介绍及相关的验证资料。
.PCR组分的主要材料〔包括引物、探针、各种酶、内标及其他主要原料〕的选择、
制备、质量标准及实验研究资料，主要包括以下内容：
脱氧三磷酸核苷〔dNTP〕
核酸的组成成分，包括：dATP dUTP dGTP dCTPffi dTTP,对纯度、浓度、保存稳定性等的详细验证资料。
由一定数量的dNTP构成的特定序列，通常采用 DN的成仪人工合成，合成后经聚丙
烯酰***凝胶电泳〔〕或其他适宜方法纯化。需提供对序列准确性、纯度、稳定性、功
能性实验等的验证资料。如为外购，应提供合成机构出具的合成产物的质检证明，如
电泳结果或高效液相色谱法〔HPLC分析图谱。
特定的带有示踪物〔标记物〕的核酸片段〔寡