文档介绍：实验报告
姓名：陈羽迪
班级：12生物制药（1）
学号：20**********
实验一：淋巴细胞的分离
优秀
良好
中等
及格
不及格
成
绩
、实验目的
熟悉人外周血淋巴细实验报告
姓名：陈羽迪
班级：12生物制药（1）
学号：20**********
实验一：淋巴细胞的分离
优秀
良好
中等
及格
不及格
成
绩
、实验目的
熟悉人外周血淋巴细胞的组成
熟悉人外周血淋巴细胞分离的方法
熟悉密度梯度离心法分离淋巴细胞的原理和方法
二、方法步骤、观察内容
1、采静脉血2ml加入抗凝管，轻轻摇动试管，混匀， 5min后加入Hank's液2ml，手动轻轻摇匀。
2、将抗凝血全部沿管壁缓慢加至另一含 2ml淋巴细胞分离液管的液面上，注意保持两种液体界面清晰。
3、将试管平衡后置水平式离心机， 1000rpm离心20min。
4、用毛细吸管仔细吸取血浆与分层液界面处淋巴细胞层至一刻度离心管内。
5、加入5倍体积的Hank's液，手动旋转试管使液体混匀， 1000rpm离心10min，弃上清，沉淀即主要为淋巴细胞（或单位个核细胞）。加入含 10%灭活小牛血清 Hank' s液1 ml，混匀后进行计数。
（备注：如做淋巴细胞转化或其它培养，所用试剂、器材应是无菌的。）
6、细胞存活率检测：取 10ul淋巴细胞悬液加入 %台盼蓝染色液10ul，混匀。取10ul加入血细胞计数板，精制片刻，置显微镜高倍镜下观察。
三、观察结果
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离心后
离心前
如图：离心前上层为红色，分离液层（下层）为白色。
离心后分为四层。血浆层为黄色，淋巴细胞层为白色。分离液层为浅黄色红细胞层为红色。
结果计算：
四个大方格中淋巴细胞总数为 339
单个核细胞总数=339/4 X 5 (稀释倍数)X 1X 10人4= X 10人6
细胞存活率=226/(226+10)=% 四、分析讨论
人外周血中的淋巴细胞组成？
T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞
根据细胞的表面标志分离淋巴细胞的原理是什么？
不同细胞表面生物学特性不同不同细胞表面分化抗原不同。
具体如下图:
一，T细胞表面标志及其亚群
二、B细胞表面标志
k CD3+CD4+CDH-辅幽性T細胞 (kelpTt'ulLTh)
k CI)3+CL)4-CDM+^J(fe4性T貓胞 t cytotoxic T ccH,Tc or CTL )
k CIM+C[[詰+调节性T如胞
t rejjulatory T tdl,Tr or 1 reg)
尸Smlg. Fc覺体、茅曲受体、EB弟垂受体，部佥 CD分子是B細胞的畫要袅面标志，其中以Sm廂为B舗胞所時有，是鉴定B细胞可窕的标.
F cm卯CM分子：可将B细胞区分为时如胞$^腔细胞,，而脱如胞仅井CD19阳性，：B2fe胞为通常所指的B細胞.

人类NK细胞表面标志主要以
CD16, CD56来认定，临床上将
CD3