碱裂解法中提取质粒DNA的设计方案.pdf

文档介绍：设计作品名称 碱裂解法中提取质粒 DNA 的设计方案
一、选题背景
质粒(Plasmid)是附加到细胞中的非细胞的染色体或核区 新配置的裂解溶液 ，上下轻柔颠倒 4～5 次，使
其彻底混匀，在室温下放置 5～15min。
300 μL 的碱裂解溶液 3。盖上离心管，轻柔的上下颠倒
7～8 次，使其离心管中的溶液不再有分层的两个液相，放置于冰上 10min。
℃，20000 g 离心 10min，取 600 μL 上清（注意不要吸取到沉淀）。
：***仿，通过剧烈的震荡混合有机物和溶液的水相，然后用
离心机 20000 g 离心 2 min，转移上层水相到新离心管中。
（三）质粒 DNA 的回收
600 μL 异丙醇，剧烈振荡混合溶液从而获得沉淀，
于室温下放置 2 min。
g 离心 5 min，去除溶液收集质粒 DNA 沉淀。
，最大限度的去除管中残余溶
液。
1 mL 70% 乙醇于沉淀中，将离心管颠倒数次，不需要剧烈振荡，用离心机在
室温下 20000 离心 2 min，回收 DNA。
c 的方法去除上清，并将其管盖打开，置于超净工作台中知道乙醇全
4部挥发并在管中未发现有液体残留。
100 μL RNase A（20 μg/mL）的 TE 溶液重新溶解沉淀后保存于-80℃中。
（四）检验质粒 DNA

（1）利用琼脂糖凝胶电泳检测，观察质粒 DNA 的完整性，观察其是否出现开环或半
开环现象。完整的质粒 DNA，电泳图中只会有一条带的现象。
（2）利用紫外分光光度计，检测质粒 DNA 溶液在波长 260nm、280nm 和 230nm 吸光
度，从而计算 260 与 280 的比值及 260 与 230 的比值，可得知质粒 DNA 纯度是否合格。纯
DNA 的 A260/A280 比值为 ，如果比值低，表示受到蛋白(芳香族)或酚类物质的污染，
需要纯化样品。纯 DNA 和 RNA 的 A260/A230 比值为 。若比值小于 标明样品被碳水
化合物(糖类)、盐类或有机溶剂污染，需要纯化样品。

（1）琼脂糖凝胶电泳：DNA