文档介绍：主要步骤如下：
取 50mg 左右的经无水乙醇浸泡过的肌肉样品，用灭菌的牙签挑成细丝状，
自然晾干。转入 1? 5ml 离心管中，加入 500 卩 I DNA 裂解液，加入 5ml 20mg/ml 蛋白酶 K主要步骤如下：
取 50mg 左右的经无水乙醇浸泡过的肌肉样品，用灭菌的牙签挑成细丝状，
自然晾干。转入 1? 5ml 离心管中，加入 500 卩 I DNA 裂解液，加入 5ml 20mg/ml 蛋白酶 K 振荡混匀。 55T 水浴保温 2? 3 小时，每隔 10min 摇匀一次。
(2) 加入等体积的 Tris 饱和酚，摇匀，用封口膜封好， 37C 水浴 2? 3 小时。每隔
10min 摇匀一次。
(3) 10, OOOrpm 离心 10min 小心转移上清液至一新离心管中，加入等体积的酚 / ***
仿(1 ： 1) ，摇匀 5? 10min 。
10, OOOrpm 离心 10min 小心转移上清液至一新离心管中，加入等体积的***
仿‘摇匀 5? 10min 。
(5) 10, OOOrpm 离心 10min, 转移上清液至一新离心管中，加入 倍体积的异
丙醇以及 体积的 3mol/LNaAc ，摇匀 1? 2min 。
置于门水箱中 3 小时。
鱼类总 DNA 的纯化
试剂： 70% 乙醇，无水乙醇， 1XTE ( ) 、1% 琼脂糖。
将 (6) 的总 DNA 溶液 、10 ，OOOrpm 离心 10min 、去上清液 、留下沉淀。用 70% 乙醇 500 卩 I 洗脫，剧烈摇匀，用手指弹击。重复此步骤一次。
(2) 10, OOOrpm 离心 10min, 去上清液，留下沉淀，加入 500 卩 I 无水乙醇洗脱，
剧烈摇匀，用手指弹击。
10, OOOrpm 离心 10min 去上清液 ，把离心管斜置于超净工作台中 ，自然晾
干。
加入 50 卩丨 1XTE 溶解 DNA 沉淀 ，用手指弹击 ，室温放置 30min ，取 3 卩丨
DNA 用 1 %琼脂糖进行电泳检测。
(5) 每个 DNA 样品分成两份 ，一份一 20C 保存备用，另一份 4C 保存进行下一步实
验。
DNA 的提取
总 DNA 的提取采用改进的高盐法。
1、 取鱼背部肌肉约 O? Olg, 挥发乙醇后放入 管中用无菌小剪刀剪碎，加
入 400ZSDS 提取缓冲液和 8 yLOmg/mL 的蛋白酶 K,混均，放在 55C 水浴锅中水浴 2
h 或者