文档介绍：实验五人淋巴细胞的培养2jsp
一、实验目的
熟练掌握RPMI 1640培养基的配制方法。
二、实验原理
细胞培养使用的培养基一般是由合成培养基和小牛血清配制而成。合成培养基有商品出售，它是根据细胞生长的需要按一定配
实验五人淋巴细胞的培养2jsp
一、实验目的
熟练掌握RPMI 1640培养基的配制方法。
二、实验原理
细胞培养使用的培养基一般是由合成培养基和小牛血清配制而成。合成培养基有商品出售，它是根据细胞生长的需要按一定配方制成的粉状物质。其主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机离子和其他辅助物质。它的酸碱度和渗透压与活体内细胞外液相似。
小牛血清含有一定的营养成分，更重要的是它含有细胞生长所必需的生长因子；酶、微量元素和激素；保护作用；提供伸展和贴附因子等，是合成培养基所无法替代的。此外它还能中和有毒物质（重金属、抗菌素）的毒性。
小牛血清
氨基酸是组成蛋白质的基本单位。不同种类的细胞对氨基酸的要求各异，但有几种氨基酸细胞自身不能合成，必须依靠培养基提供，这几种氨基酸称为必需氨基酸。其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。因此，各种培养液中都有较大量的谷氨酰胺。但是，由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20℃冰箱中保存，在使用前加入培养液内。
L-谷氨酰胺
三、仪器、材料和试剂
超净工作台
高压灭菌锅
多重蒸馏水器
磁力搅拌器
天平
微量加样器
（一）仪器
（二）用具、材料
细胞培养瓶
量筒、研钵、烧杯、漏斗、滤纸
pH试纸
微孔过滤器（）及注射器
各种规格的Tip 、离心管
（三）试剂
NaOH、 酚红
RPMI 1640干粉
小牛血清、青霉素、链霉素
NaHCO3 、L-谷氨酰胺
三蒸水
要使细胞能在体外长期生长，必须满足两个基本要求：
一是供给细胞存活所必需的条件，如适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖及其有关的生长因子、氧气、适宜的温度，注意外环境酸碱度和渗透压的调节。
二是严格控制无菌条件。
注意
（四）生长培养基的配制
1．双抗： （100000U/ml）
160万单位青霉素/瓶+8ml 3DW = 20万单位/ml
1g链霉素+5ml 3DW = 200000 μg /ml
各取以上的液体5ml混合，使其浓度为10万单位/ml， ，-20℃贮存。
2．谷氨酰胺储备液（200mmol/L）：
（30 mg/ml= 200 mmol/L),。
-20℃贮存。
3. RPMI 1640生长培养基的配制
50毫升
储备液浓度
终浓度
RPMI 1640培养液
—
—
谷氨酰胺
30mg/ml
双抗
100000u/ml
100u/ml
小牛血清
5
—
10%
六、思考题：
血清在细胞培养中有何作用？
为什么配制培养基之前要反复处理配制用水并要事先高压处理？
配制培养基时调节pH值的目的是什么？
谢谢观赏