文档介绍：基因检测操作流程
MTHFRC677T,MTHFRA1298C,MTRRA66G
实验流程
样本果集基因坦DNA提取PCR扩增信恩录入I■-i・1L-1»i=i■■■»'«■■18»W结果报告堵果判读
、操作步骤适用仪器：普通p基因检测操作流程
MTHFRC677T,MTHFRA1298C,MTRRA66G
实验流程
样本果集基因坦DNA提取PCR扩增信恩录入I■-i・1L-1»i=i■■■»'«■■18»W结果报告堵果判读
、操作步骤适用仪器：普通pcFa样本要求：EDT砒凝剂的静脉全血（100^I）室温保存不超过7天，2〜8C保存不超过1个月，-20C保存不超过3个月，反复冻融次数不超过5次；DNA勺浓度应不低于5ng/I,A260/A280应在~之间。有血块的样本需经匀浆处理或用组织研磨仪研磨处理后再进行全血DNA勺提取。
检验方法：（试剂盒中的检本测卡、阳性/阴性对照卡上标识解释如下：M表示突变型，WT表示野生型，C表小质控线，T表小检测线。）A:样本DNA勺制备试剂盒准备工作：
1、活洗液BW-I:用50ml量筒分别移取35ml无水乙醇（分析纯）和35ml异丙醇加入至活洗液BW-I试剂瓶中，颠倒混合均匀，在试剂瓶上标明“已加入酵”和日期，备用。
2、活洗液BW-II:用50ml量筒移取49ml无水乙醇加入至活洗液BW-II试剂瓶中，颠倒混合均匀，在试剂瓶上标明“已加入酵”和日期，备用。
3、蛋白酶K准备：取出蛋白酶K,室温解冻，涡旋混匀后备用。
4、磁性微粒准备：将磁性微粒涡旋混匀，保证均一。
实验操作步骤：
将20l蛋白酶K溶液加入2ml离心管的管底。依次加入100l全血、200l裂解液BL,用涡旋振荡器混合15sec（以下简称涡旋混匀），56C水浴20min。
向步骤1裂解处理的样品中依次加入300l结合液BI、25l的磁性微粒（移取前必须充分涡旋混匀），涡旋混匀，室温静置5min。磁性分离5min,弃上活。
从磁性分离器上取出离心管，加入400l活洗液BW-I,涡旋混匀，磁性分离至上活澄活（期间上下颠倒数次，以活洗离心管管壁），弃上活；重复本步操作，以400^l活洗液BW-I重复活洗一次。
从磁性分离器上取出离心管，加入400l活洗液BW-II，涡旋混匀，磁性分离至上活澄活（期
间上下颠倒数次，以活洗离心管管壁)，弃上活(尽可能弃去所有的活洗液BW-II)打开离心管盖，将其室温晾十5min。
从磁性分离器上取下离心管，向管中加入100l洗脱液E&涡旋混匀，56C水浴5min。
将离心管置于磁性分离器上，磁性分离至上活澄活。将上活液(分离纯化得到的DNA溶液)
转移到2ml离心管中，直接用于下游实验或于-20C保存备用。
B:PCFT增液准备
每人份需做两个反应，取两个无菌PCR薄壁管，在PC眺壁管管盖上依次标有MWT
将试剂从-20C取出平衡至室温，瞬时离心。在标有M的管中加入2卯l扩增液(M,在标有WT的管中加入29心扩增液(WT。
分别向以上M和WT各管中加入1心反应液。将管盖盖紧后，涡旋混匀，瞬时离心待用。
C:待检测DNA羊本的配制在上述标有MW1管中分别加入3心待测基因组DNA分别再加入17lddH2g终体积为
50l将管盖盖紧后，涡旋混匀，瞬时离心。
D:P