文档介绍：实验六肠道杆菌的分离鉴定黄红莹实验目的要求?1、掌握肠道杆菌的主要生物学性状?2、熟悉肠道杆菌有关的鉴定方法标本脓血便、肛拭子选择/鉴别培基生化反应血清学鉴定克氏克氏双糖铁双糖铁培养基培养基, ,动力动力- -靛基质靛基质- -尿素尿素半固体琼脂培养基半固体琼脂培养基玻片凝集试验 SS平板,中国兰,EMB 平板(一)肠道杆菌的形态、染色及在选择培养基上的生长情况?[材料]?1、菌种:大肠杆菌、痢疾杆菌培养物?2、培养基: SS平板、 EMB ?3、标本片:大肠杆菌、痢疾杆菌 SS 琼脂平板(1)营养物质:牛肉膏、蛋白胨(2)抑制剂:胆盐、枸椽酸盐、煌绿等,抑制非致病菌的生长;但胆盐能同时促进病原菌的生长。(3)鉴别用糖:乳糖(4)指示剂:中性红 SS 琼脂培养基选择培养原理: ?此培养基是强选择性培养基, 柠檬酸钠和煌绿对大肠杆菌的生长,对菌体蛋白质的合成起强的抑制作用,而对肠道致病菌则无抑制作用。柠檬酸钠能缓和胆酸盐对肠道致病菌的有害作用,并能中和煌绿和中性红等染料的毒性。中性红为指示剂,酸性时呈现红色, 碱性时呈淡黄色。大肠杆菌分解乳糖产酸,通过中性红显色, 菌落大而混浊,呈现红色. ?志贺氏菌属和沙门氏菌属的细菌不分解乳糖,而分解蛋白质产生碱性物质,菌落形态为光滑微黄透明,园形、中等大小,边缘整齐的菌落。?由于宋内氏痢疾杆菌有分解胆盐中的某些物质和发酵乳糖(产酸)较慢等特点,而使菌落呈淡红或红色的较大或边缘不整齐的扁平菌落。某些沙门氏菌属及变形杆菌因产生硫化氢,使菌落呈现黑色中心。伊红美兰琼脂培养基(EMB)选择培养原理: ?此培养基为弱选择性培养基。以伊红美兰作指示剂. ?(1) 大肠杆菌分解乳糖产酸时染上伊红,因为伊红和美兰结合所以菌落不是红色而呈现紫黑色,且有金属光泽(大肠杆菌)或棕色(产气杆菌),扁平混浊,而较大边缘色淡的菌落。?(2) 致病菌的菌落为无色半透明、园形,中等大小,边缘整齐的菌落,在靠近大肠杆菌的可疑菌落往往呈现淡兰色。[方法] ?1、分离培养、观察菌落特征: 分别取大肠、痢疾杆菌培养物,用分离划线方法接种 SS 平板或 EMB 培养基 37℃培养 18-24h 以后观察结果(记录)。?2、革兰染色、观察形态学特征: 取各菌培养物少许涂片,革兰染色、镜检(画图)。[结果] ?1、菌落观察(1) SS (1) SS 平板平板(2) EMB (2) EMB 平板平板大肠杆菌大肠杆菌致病菌致病菌