DNA浓度测定.docx

文档介绍：OD 值
1. 朗伯 比尔 ( Lambert — beer)光吸收 TE律：
A = — lgT = e b c
一吸光度，又称光密度“： '
—
—— 为透过吸收池的光强。
T— 一透光度， T =
OD 值
1. 朗伯 比尔 ( Lambert — beer)光吸收 TE律：
A = — lgT = e b c
一吸光度，又称光密度“： '
—
—— 为透过吸收池的光强。
T— 一透光度， T = I / I 。， I 。一一为照射到吸收池上的光强， I
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- ―摩尔吸光系数或克分子吸光系数
(L?mol — 1?cm— 1)
。
b—
样品光程 ( cm),通常使用
的吸收地， b-1cm。
—
C?- 样品浓度 ( mol/L ) 。
由上式可以看出：吸光度 A 与物质的吸光系数 “亦口物质的浓度 “C成正比。
2.

DNA

和

RNA

的

OD

值
原理
喋吟碱和嚅嚏碱具有共轴双键，使碱基、核昔、核昔酸和核酸在

240~290nm

的紫外波段有

一强烈的
吸收峰，因此核酸具有紫外吸收特性。

DNA

钠盐的紫外吸收在

260nm

附近有最大
吸收值

(

图

3-25)，在

230nm

处为吸收低谷，其吸光率

(

absorbance^以

A260

表示，

A260
是核酸的重要性质，

RNA

钠盐的吸收曲线与

DNA

无明显区别，蛋白质在

280nm 处有最大
的吸收峰，盐和小分子那么集中在

230nm

处，对于纯的核酸溶液，测定

A260 , 即可利用核酸

的比吸
光系数计算溶液中核酸的量，核酸的比吸光系数是指浓度为

1^〃 mL

的核酸水溶液
在

260nm

处的吸光率，天然状态的双链

DNA

的比吸光系数为

,变性

DNA

和

RNA

的
比吸光系数为

。据朗波—比尔光吸收定律 A = -lgT =

￡b(M c= A/m

而 b 通常为

1cm,
所以，通常以

1OD 值相当于 50 mL 双螺旋 DNA ，或 40 mL

单螺旋 DNA

(或 RNA ),

或 20

必

mL

寡
核昔酸计算。
纯度
DNA 和 RNA 的纯度可以通过测定 2