文档介绍：DNA的提取方法简介
由于高等动物DNA 主要存在于细胞核与线粒体中，所以提取时有两个困难（高等植物与此类似）：
①破碎细胞难；从处死动物٠分离组织器宫到破碎细胞费时长。在此时期间DNA 可能会被DN ase降解，用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA，然后将沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中,***%乙醇,% ٠80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,,,在提取过程中加入SDS.
二. 从猪脾中提取DNA
1. 操作步骤:
取鲜猪脾,去脂、血,称取10g,用预冷的1×SSC溶液洗2次，剪碎。
按睥：1×SSC=1; 5W/V 加入50ml预冷的1×SSC，用高速组织
捣碎机破碎8次,每次5秒,中间间隔30秒。
将匀浆液放在烧杯中， 于冰盐浴中冷却30分钟。4000转/分钟离心10分钟。充掉上清。沉淀物中再加2倍体积的1×SSC搅匀，离心，弃上清，重复2次。
、—。边搅拌边漫漫滴加5%SDS最终浓度达1%为止。然后加入固体***化钠使其最终浓度达1mol/L，继续搅60分钟，以确保***化钠全溶。所得混合液倒入磨口塞的锥形瓶中，加入同体积***仿—异戊醇，激烈振荡20分钟，4000r离心20分钟，上层水相取出后倒入烧杯，以同积***仿—异戊醇重复去蛋白2次。
取出水相于烧杯中，逐渐加入2倍体积95%乙醇，玻棒搅动，DNA纤维绕于璃玻棒上后挤干，用70%乙醇洗DNA纤维2次，用95%乙醇洗一次，再用***洗一次，取出并挤干。
2. 实验材料，仪器和试剂：
（1） 实验材料：新鲜猪脾：
（2）仪器：量筒：1×10、3×100烧杯：2×100，2×250；磨
口锥形瓶：1×250、1×500；吸管：1×1、1×10；滴管、玻棒、
离心机、电动搅拌器、台秤、剪刀、镊子。
（3）  试剂：
① 20×SSC：，•2H2O，PH=
水至1000ml；
②   1×SSC，×SSC由①做相应的稀释得来；
③  NaCL-Na2EDTA液：，
800ml蒸馏水中，用固体NaOH调PH=8后定容至1000；
④    5%SDS（W/V）：6gSDS溶于100ml45%乙醇中；
⑤    ***仿-异戊醇=24：1（体积比）
⑥ 其他:95%乙醇，盐冰.
数据:DNA重,产率:
待测液中测得的核酸μg数
DNA%= ×100
待测液中制品的μg数
二苯***显色法测定DNA含量
强酸、加热条件下，可以使DNA中的嘌呤碱基与脱氧核糖间的糖苷键断裂，而产生嘌呤碱基，脱氧核糖与嘧啶核苷酸。其中2ˊ脱氧核糖在酸性环境中成为ω―羟基―γ―***基戊醛，此物与二苯***反应生成蓝色化合物，在595nm处有最大吸收。DNA在40-400μg范围内光密度与DNA浓度成正比。在反应液中加入少量乙醛可提高灵敏度，而且其他化合物的干扰也显著降低。当样品含少量RNA时不影响测定，而蛋白质、多种糖及其衍生物芳香，羟基醛都能与二苯***形成各种有色物质，干扰测定。
１、二苯***试剂：***（需在70%乙醇试剂中重结晶2次)，溶于180ml冰乙酸中，再加入8ml过***酸（60%以上），混匀待用， %乙醛溶液，所配试剂应为无色。
每组需56ml
共需2800ml
２、DNA标准溶液：（须经定磷法确定其浓度） NAOH配成200微克／毫升的标准液。
每组需12ml
共需600ml
３、%乙醛：取47%，加重蒸水定容至100ml（放于冰箱中，一周之内可以使用）。
共需70ml
４、(测样品液：准确称取猪脾DNA或用紫外分光