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光电比色检验基础知识.doc

上传人:cxmckate1 2017/1/20 文件大小:323 KB

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文档介绍

文档介绍:1 光电比色分析仪的基本知识概述: 北京普朗公司的现有主要产品都是体外诊断医用设备(IVD 产品),在《医疗器械分类目录》中该类产品的管理类别是 6840- Ⅱ类。其注册工作由省级或直辖市药监局管理。是医院、卫生防疫站、血站、妇幼保健站等临床实验室及食品安全、动物检疫及科研实验室对样本进行检验的仪器。本公司现有主要产品属于光电比色分析仪器。仪器工作时检测到的原始信号是一个光信号,通过分析计算得到最终检验结果。因此光学系统的好坏对仪器的质量起着决定性的作用。下面首先介绍一下光电比色的基本知识。一. 光电比色检验的基本知识光电比色检验是指利用物质具有吸收、发射或散射光谱谱系的特点,对物质进行定性或定量的分析方法。它具有灵敏、快速、简便等特点,是生物化学分析中最常用的分析技术之一。 物质的溶液对光的选择性吸收现象物质的溶液为什么会有颜色,人看到的不同颜色,是不同波长的光对人眼睛产生的不同视觉效应。不同物质的溶液,只吸收与之对应的某个波长的光子能量,因此每种物质的溶液都有自己特定吸收光谱,即某种物质对某种波长的光有最大吸收(吸收峰) ,而对其他波长的光几乎不吸收或很少吸收, 人看到的溶液颜色只是未被吸收的可见光。因为不同物质的溶液,只吸收不同波长的光,所以人眼会看到不同物质的溶液呈现出不同的颜色。互补光:例如,紫(400~430 )与绿(500~560) ;兰(430~450) 与黄(560~590) ;青(480~500) 与红(620~700) ,互为互补光。如果看到的溶液是兰色,则溶液吸收的一定是黄色光。紫外光: λ小于 400nm 红外光: λ大于 760nm 比色原理: 由于物质溶液颜色的深浅,是随溶液浓度的改变而改变,浓度越大,颜色越深。所以可以根据溶液颜色的深浅,来判定有色溶液浓度的大小。 a) 目视比色:即将待测溶液与已知浓度水平的,相同物质的标准溶液进行颜色比较, 2 根据标准液的已知浓度和颜色深浅,从而判定待测溶液中所含待测物质的多少,达到进行定性分析和定量检验的目的。举例:目视比色法。 b) 光电比色法: 显然目视比色法只能大概判定浓度,不能准确定量。为了解决准确定量的问题,科学家创建了光电比色检测法,用光电探测器代替人的眼睛,进行比色检验。 c) 不同物质的吸收光谱曲线: 下图是用分光光度计测得的 A、B、C 三种物质的吸收光谱曲线,可以看到 A 物质在 390nm 处有一吸收峰,而 C和B 在此处无吸收,由于 A 物质在 390 处具有高的吸收,因此用 390 波长的光检测该物质时,会得到很高的灵敏度。 d) 工作波长: 为了提高仪器检验的灵敏度, 应该选择待测物质的吸收峰波长作为检验波长,这样只要待测溶液中含有被测物质,就会对入射光产生明显的吸收(检测信号)。如果浓度变化,则会引起对入射光的吸收(检测信号)产生明显变化。因此在上图中选择 560nm 波长作为检测波长,就容易测得 C物质浓度变化引起的吸光度变化值,并依此计算出浓度值。很显然如果需要检测A,B的浓度,则应分别选择390nm,470n m 作为工作波长。如果待测容器中既有 A物质,又有 B物质(伴随物),在需要检测 A物质时,却选择了 410nm 作为工作波长,则必定受到 B物质的干扰(因此时测得的吸光度值是 A和B的总和)。 e) 单色光:为了减少其它