文档介绍：乙肝病毒核酸检测实验操作流程乙肝病毒核酸检测实验操作流程广西临床检验中心唐娟主要内容? HBV-DNA 的检测原理? HBV-DNA 操作流程? HBV-DNA 检测结果分析?临床意义 DNA 提取 PCR 扩增标本采集检测原理 HBV : 用一对乙型肝炎病毒特性引物( Primer )和一条乙型肝炎病毒特异性荧光探针,配以 PCR 反应液、耐热 DNA 聚合酶( Taq 酶)、四种脱氧核苷酸单体( dNTPs )等成分,用 PCR 体外扩增法定量检测乙型肝炎病毒 DNA 原理图?每产生一条 DNA 链,就切断一条探针?每切断一条探针,就产生一个荧光信号?信号强度与结合探针的 DNA 分子数成正比操作流程一、标本采集一次性无菌注射器抽取受检者静脉血 2毫升,注入无菌的干燥玻璃管室温( 22~25oC)放置 30~60 分钟血标本使用水平离心机, 4000 转/分离心 5分钟吸取上层血清,转移至灭菌离心管血清的采集血浆的采集用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血 2毫升,注入含 EDTA 或枸橼酸钠抗凝剂的试管立即轻轻颠倒玻璃管混合 5~10次,使抗凝剂与静脉血充分混匀 5~10分钟后即可分离出血浆,转移至灭菌离心管注意事项尽量吸取血清的上层液,有纤维蛋白的标本应离心去除脂类浑浊标本拒收(离心 4000rpm , 5min ) 血清血清不能使用肝素抗凝因为对 PCR 扩增有抑制作用,-DNA 的提取打开 HBV-DNA 试剂盒↓↓取出 DNA 浓缩液、 DNA 提取液(置室温融解,充分混匀) ↓↓取已灭菌的离心管并按样本唯一编号↓↓加入 DNA 浓缩液和待测样本各 100ul (振荡混匀) ↓↓ 12000rpm ,离心 10min ↓↓去上清,沉淀中加入 20ulDNA 提取液(振荡混匀) (阴、阳性质控品处理方法:各取 50ul ,分别加入 DNA 提取液各 50ul ) ↓↓ 100 ℃恒温干浴 10min ↓↓ 12000rpm 离心 5min 注意事项。不能用移液器混匀 12000rpm 离心时一定要统一离心管摆放方向。离心后应沿着沉淀存在的对侧缓缓吸去上清,枪头贴管壁顺着液面下移,防止带走不可见的沉淀物。如沉淀不明显可以保留少量液体,建议将移液器量程调至 190ul 一次性吸取。