实验六血细胞计数及血涂片制作.ppt

文档介绍：实验六血细胞计数及血涂片制作
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血细胞计数
1．熟悉并清洗计数板和盖玻片
2．稀释血液：
血样采集：兔耳缘静脉采血
血样抗凝：肝素钠抗凝
血样稀释：如下
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血细胞计数
1．熟悉并清洗计数板和盖玻片
2．稀释血液：
血样采集：兔耳缘静脉采血
血样抗凝：肝素钠抗凝
血样稀释：如下
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实验操作
红细胞稀释液：生理盐水
白细胞稀释液：冰醋酸 (盐酸)
红细胞计数：% NaCl + ，稀释200倍
白细胞计数：1% HCL + 血，稀释20倍
3．充池：（混匀，从中间取）
4．静置计数板 2min
5．计数
6．计数原则：数上不数下、数左不数右
7. 计算：红细胞数/L=N*50*106*200=N*1010
白细胞数/L=N/4*10*20*106=N*5*107
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血细胞计数计数板
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保证计数板和盖玻片清洁；以防影响计数结果的准确性 。
一次完成充池，如充池过少、过多、有气泡或出现任何碎片，应拭净计数板及盖玻片后重新操作。
充池后平放计数板，不能移动盖玻片。
计数板中细胞如果严重分布不均，应重新充池计数。
凡压线的细胞应按照数上不数下、数左不数右的原则，避免漏数或重复计数。
注意事项
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血细胞的分类与计数
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血液涂片的制备
1、每份样本制作3张血涂片。要求所用玻片清洁、干燥、无尘，大小为25 mm×75mm，～。并有明确标记。如果样本中白细胞数量少时，需要制备更多血涂片（如6张）。
2、使用EDTA－K2抗凝血液样本时，应在采集后4小时内制备血涂片。在制片前，样本应充分混匀。注意，样本不能冷藏。
3、用楔形技术制备血涂片。在玻片近一端1/3处，加一滴（）充分混匀的血液，握住另一张较狭窄的、边缘光滑的推片，以30º～45º角使血滴沿推片迅速散开，快速、平稳地推动推片至玻片的另一端。
4、在1小时内，用染液染色；或在1小时内，用无水甲醇（含水量﹤3%）固定后染色。
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推片技巧
推片倾斜45°±1，推成血膜长度25～35mm，宽度18～20mm，血膜四周留有空隙区，血膜终尾离玻片终端至少10mm，血膜均匀，薄如蝉翼，尾端形如弧状，迅速扇（摇）干，血膜具有头、体、尾不同厚薄区域。此外，涂片时，还要考虑患者的血液状态，如贫血程度、血液粘稠度、WBC或有核细胞多少等因素，调整推片技巧。
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血膜至玻片边缘约5mm
血膜至玻片一端约为总长1/3
血涂片头部，涂片厚
血涂片体部的检查区域
血涂片尾部，涂片太薄
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染色步骤
取新鲜血液涂片，晾干；
加刘A溶液（覆盖血涂片为宜），染色30s；
加刘B溶液于A液上（约为A的2倍），以洗耳球吹出微风，使液面产生涟漪，染色30s-1min；
水洗，干燥，镜检；
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