文档介绍：实验1DNA提取纯化检测
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染色体DNA的制备方法
1. 取800μl抗凝血液置于5ml离心管中。
2. 往管中加3ml红细胞裂解液，轻摇数次，置冰上5分钟，期间间歇摇动
几次。
3. 4000rpm，室温离心5实验1DNA提取纯化检测
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染色体DNA的制备方法
1. 取800μl抗凝血液置于5ml离心管中。
2. 往管中加3ml红细胞裂解液，轻摇数次，置冰上5分钟，期间间歇摇动
几次。
3. 4000rpm，室温离心5分钟，弃上清。
4. 往管中加入3ml红细胞裂解液，重悬沉淀，冰上5分钟，期间摇几次。
5. 4000rpm，离心5分钟，弃上清。
6. 重复步骤4、5四至五遍，至出现明显白色沉淀。
7. 用1×PBS重悬白色沉淀。
8. 4000rpm，离心5分钟，弃上清。
9. 每管中加入500μl白细胞裂解缓冲液（每小组配制1ml)，重悬细胞，加入
20μl proteinase K（20mg/ml），，置55℃水浴
1小时。
10. 加入酚：氯仿500μl，盖紧后上下颠倒几次10000rpm，离心5分钟，取上层水相，，加入氯仿500μl，盖紧后上下颠倒几次10000rpm，离心5分钟，取上层水相至5ml离心管。 （两次取上清前用剪刀将枪头尖剪去3mm)
11. 加入1ml无水乙醇,可见混浊，盖紧后上下颠倒混匀可见DNA凝集成絮状，溶液又变澄清。
12. 12000rpm，离心2分钟，弃上清。
13. 用1ml 70%乙醇洗涤沉淀，12000rpm，离心2分钟，弃上清。
14. 开盖室温干燥沉淀2分钟。
15. 加入50μl DDW（无菌水）55℃水浴5分钟溶解DNA,取10μl电泳。
16. 加入3ml DDW至剩余样品中，室温混合2分钟，测OD260和0D280，计算DNA浓度及OD260/0D280。
染色体DNA的制备方法
琼脂糖凝胶电泳方 法
，调节电泳槽平面至水平，检查稳压电源与正负极的线路。
2. 将电泳板置于制胶器中或用玻璃胶带封好制胶板两端，防止浇板时出现渗漏。选择孔径大小适宜的点样梳，垂直架在电泳板负极的一端，-。
3. 制备琼脂糖凝胶：按照被分离DNA分子的大小，决定凝胶中琼脂糖的百分含量。称取琼脂糖，溶解在电泳缓冲液中，大电泳槽约160毫升，小电泳槽约35毫升凝胶液，置微波炉或水浴锅中加热，至琼脂糖全部溶化。
℃左右时，在凝胶溶液中加入EB（），摇匀，轻轻倒入电泳板上，除去气泡。
5．待凝胶冷却凝固后（约30分钟），在电泳槽内加入电泳缓冲液，大电泳槽约需1200ml，小电泳槽约180ml。从制胶器取出电泳板，放入电泳槽，然后小心取出点样梳，保持点样孔的完好，去除空内气泡。
6．待测的DNA样品中，加五分之一体积的溴酚蓝指示剂点样缓冲液（6×loading Buffer）。如果待测样品太小要用电泳缓冲液稀释，再加五分之一体积的溴酚蓝指示剂点样缓冲液。如点样体积10μl样品与2μl溴酚蓝指示剂点样缓冲液，混匀后小心地进行点样，记录点样顺序和点样量。
7．打开电源，DNA的迁移速度与电压成正比，与琼脂糖含量有关。最高电压不超过5V/cm(大电泳槽不超过200V，小电泳槽不超过150V)。
8．电泳时间看实验的具体要求而定，在电泳途中可用紫外灯直接观察，DNA各条条带分开后，可以结束电泳。一般20分钟~2小时，取电泳凝胶块直接用凝胶成像系统成像和分析。
琼脂糖凝胶电泳方 法
DNA样品的纯化和定量检测方法
1．取DNA粗制样品，加入RNase至终浓度10µg/µl，37 ℃。
2．加入酚：氯仿：异戊醇（25：4：1）等体积抽提1~3次，12000 rpm，离心5分钟,取上清。
3．加入1/10倍体积3M NaAc（），2倍体积无水乙醇混匀，室温下30~60min。
4．15000 rpm，离心10分钟。
5．DNA沉淀用冰预冷70 %乙醇洗1次，开盖37 ℃干燥10min（使乙醇挥发）。
6．加入30µl TE buffer，37 ℃水浴至沉淀溶解。
7．取10 µl DNA 1 %琼脂糖凝胶电泳，凝胶成像系统记录和分析结果，估计样品DNA分子量。
8．取10 µl DNA母液稀释至1000ul，在紫外分光光度计上测A260和A280。计算样品DNA浓度，判断样品浓度和DNA纯度。
电泳注意事项
1. 琼脂糖的质量：
琼脂糖（