实验三基因的PCR扩增技术.ppt

文档介绍：实验三基因的PCR扩增技术
三、实验材料
BCG基因组DNA
10PCR反应缓冲液、4dNTPs、Taq DNA聚合酶、模板DNA、引物 （P1、P2）、超纯水SW
PCR反应管、移液器、 PCR仪、离心机
四、实验步骤
实验三基因的PCR扩增技术
三、实验材料
BCG基因组DNA
10PCR反应缓冲液、4dNTPs、Taq DNA聚合酶、模板DNA、引物 （P1、P2）、超纯水SW
PCR反应管、移液器、 PCR仪、离心机
四、实验步骤
引物设计
准备PCR反应溶液
PCR扩增反应
结果检测
Rv1791-F： ATGAATTCAGGAAGACAGCATGTCGTTC（EcoR I）
Rv1791-R：
ATCTCGAGTGTTCCCCCTCTCCTTCAG
（XhoI）
（二）准备PCR反应溶液
10×PCR反应缓冲液
4×dNTPs
引物P1 1μl（10nM）
引物P2 1μl
模板DNA 2μl
Taq DNA聚合酶
用无菌去离子水至 25μl
↓
用手指轻弹PCR反应管管底部，使溶液混匀
↓
在台式离心机中离心2秒以集中溶液于管底
在PCR仪中设计如下反应程序：94C、5min；94C、30sec，61C、40sec，72C、30sec，30个循环；72C、5min
（三）PCR扩增反应
将已混匀的PCR反应管置于PCR仪的反应孔中，盖好盖子
进行反应。反应完毕，将样品取出置于冰浴中待用
（四）结果检测
本PCR扩增的产物DN***段长度为300bp，%琼脂糖凝胶中进行电泳检测。从每个反应管中取5ul PCR产物进行电泳检测。
1
2
3
4
5
循环
94℃ 30s
℃ 40s
72℃ 60s
94℃ 30s
℃ 40s
72℃ 60
94℃ 30s
℃ 40s
72℃ 60s
94℃ 30s
℃ 40s
72℃ 60s
94℃ 30s
℃ 40s
72℃ 60s
谢谢