文档介绍：实验二蛋白质的性质实验一
实验原理
考马斯亮蓝反应
考马斯亮蓝G250在酸性溶液中以游离形式存在(呈棕红色)，当与蛋白质通过疏水作用力结合后变为蓝色。它的染色灵敏度比氨基黑高 3 倍，反应速度也快(~2 min 内即可达到平衡实验二蛋白质的性质实验一
实验原理
考马斯亮蓝反应
考马斯亮蓝G250在酸性溶液中以游离形式存在(呈棕红色)，当与蛋白质通过疏水作用力结合后变为蓝色。它的染色灵敏度比氨基黑高 3 倍，反应速度也快(~2 min 内即可达到平衡点)。
在 ~ mg Pr 范围内，[ Pr ] 与 A595 nm 值成正比。
Date
8
西南大学药学院生物制药实验室
实验仪器及试剂
考马斯亮蓝G250
%苯酚
浓***
%茚三***
尿素
1%硫酸铜
2%卵清蛋白溶液
Date
9
西南大学药学院生物制药实验室
实验步骤
双缩脲反应
取少量尿素结晶于干燥的试管中，用微火加热熔化 → 尿素重又开始硬化时停止加热 → 可见到氨气释出 → 冷却后加入 10% NaOH 溶液约 1 ml，振荡混匀 → 加 1 % CuSO4 溶液 1 滴，振荡 → 观察颜色变化
取 1 ml 卵清蛋白溶液于干燥的试管中 → 加 10% NaOH 溶液约 2 ml，摇匀 → 加 1 % CuSO4 溶液 2 滴，随加随振荡 → 观察颜色变化
茚三***反应
取两只试管，分别加入 2% % 的 Gly 溶液 1 ml → 各加 ml % 的水合茚三***溶液，混匀 → 在沸水浴中加热 1~2 min → 观察颜色变化
在一小块滤纸上滴一滴 % 的 Gly 溶液 → 风干 → 在原处滴一滴 % 的茚三***-乙醇溶液 → 将滤纸在微火旁烘干 → 观察颜色变化
Date
10
西南大学药学院生物制药实验室
管号
1
2
3
4
5
6
材料(滴)
鸡蛋清溶液 4 滴
指甲少许
头发少许
% 苯酚4 滴
% Trp
4 滴
% Tyr
4 滴
浓***(滴)
2
40
40
4
4
4
待个试管出现黄色后，在室温下逐滴加入10% NaOH 溶液至碱性，观察颜色变化 .
现象
解释
黄色反应
Date
11
西南大学药学院生物制药实验室
管号
试剂
1
2
蛋白质溶液(ml)
0

蒸馏水(ml)
1

考马斯亮蓝染液(ml)
5
5
现象
解释
考马斯亮蓝
Date
12
西南大学药学院生物制药实验室
谢谢欣赏