文档介绍：普通PCR原位PCR反向PCF^反转录PCR勺基本原理和操作步骤普通PCR
1概述聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction），简称PCR是一种分子生物学技术，用丁放大特定的DN"段。可看作生物体外的特殊DNAfi制。应，一般在2〜4小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。
，DNA粗制品及RNA匀可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活组织等DNAT增检测。
，不出现扩增条带PC版应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量，④PCR®环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。
模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时，不出现扩增带，极有可能是标本的消化处理，模板核酸提取过程出了毛病，因而要配制有效而稳定的消化处理液，其程序亦应固定不宜随意更改。
酶失活：需更换新酶，或新旧两种酶同时使用，以分析是否因酶的活性丧失或不够而导致假阴性。需注意的是有时忘加Taq酶或漠乙锭。
引物：引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称，是PCRfe败或扩增条带不理想、容易弥散的常见原因。有些批号的引物合成质量有问题，两条引物一条浓度高，一条浓度低，造成低效率的不对称扩增，对策为：①选定一个好的引物合成单位。②引物的浓度不仅要看。则，更要注重引物原液做琼脂糖凝胶电泳，一定要有引物条带出现，而且两引物带的亮度应大体一致，如一条引物有条带，一条引物无条带，此时做PCR有可能失败，应和引物合成单位协商解决。如一条引物亮度高，一条亮度低，在稀释引物时要平■衡其浓度。③引物应高浓度小量分装保存，防止多次冻融或长期放冰箱冷藏部分，导致引物变质降解失效。④引物设计不合理，如引物长度不够，引物之间形成二聚体等。
Mg2袜度：M2+＞度对PCRT增效率影响很大，浓度过高可降低PC"增的特异性，浓度过低则影响
PCFT增产量甚至使PCFT增失败而不出扩增条带。反应体积的改变：通常进行PCRT增采用的体积为20ul、30ul、50ul或100ul,应用多大体积进行PCFT增，是根据科研和临床检测不同目的而设定，在做小体积如20ul后，再做大体积时，一定要模索条件，否则容易失败。
物理原因：变性对PCFT增来说相当重要，如变性温度低，变性时间短，极有可能出现假阴性；退火温度过低，可致非特异性扩增而降低特异性扩增效率，退火温度过高影响引物与模板的结合而降低PCFT增效率。有时还有必要用标准的温度计，检测一下扩增仪或水溶锅内的变性、退火和延伸温度。
靶序列变异：如靶序列发生突变或缺失，影响引物与模板特异性结合，或因靶序列某段缺失使引物与模板失去互补序列，其PCFT增是不会成功的。
，有时其条带更整齐，亮度更高。
引物设计不合适：选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性，因而在进行PCF扩增时，扩增出的PCFT物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短，容易出现假阳性。需重新设计引物。