文档介绍：第七章 高效液相色谱分析法
液相色谱固定相
液相色谱流动相
第三节 液相色谱的固定相与流动相
High performance liquid chromatograph, HPLC
Stationary phase and mobile phase of HPLC
2017/11/11
液相色谱固定相
1. 液-液分配及离子对分离固定相
(1)全多孔型担体
氧化硅、氧化铝、硅藻土等制成的多孔球体;早期采用100μm的大颗粒,表面涂渍固定液,性能不佳已不多见。
现采用10μm以下的小颗粒,化学键合制备柱填料。
(2)表面多孔型担体
(薄壳型微珠担体)
30~40μm的玻璃微球,表面附着一层厚度为1 ~ 2μm的多孔硅胶。
表面积小,柱容量底。
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(3)化学键合固定相
化学键合固定相:应用最广、性能最佳的固定相;
a. 硅氧碳键型: ≡Si—O—C
b. 硅氧硅碳键型:≡Si—O—Si — C
稳定,耐水、耐光、耐有机溶剂,应用最广;
c. 硅碳键型: ≡Si—C
d. 硅氮键型: ≡Si—N
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化学键合固定相的特点:
(1)传质快,表面无深凹陷。
(2)寿命长,化学键合,无固定液流失,耐流动相冲击; 耐水、耐光、耐有机溶剂,稳定。
(4)选择性好,可键合不同官能团,提高选择性。
(5)有利于梯度洗脱。
存在着双重分离机制:(键合基团的覆盖率决定)
高覆盖率:分配为主;
低覆盖率:吸附为主。
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-固吸附分离固定相
种类:硅胶、氧化铝、分子筛、聚酰胺等。种类有限,应用面相对较窄。
结构类型:全多孔型和薄壳型;
粒度:5~10 μm。
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结构类别:
(1)薄壳型离子交换树脂
薄壳玻璃珠为担体,表面涂约1%的离子交换树脂。
(2)离子交换键合固定相
薄壳键合型;微粒硅胶键合型(键合离子交换基团)。
树脂类别:
(1) 阳离子交换树脂(强酸性、弱酸性)。
(2) 阴离子交换树脂(强碱性、弱碱性)。
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4. 空间排阻分离固定相
(1)软质凝胶
葡聚糖凝胶、琼脂凝胶等。多孔网状结构;
水为流动相。适用于常压排阻分离。
(2)半硬质凝胶
苯乙烯-二乙烯基苯交联共聚物,有机凝胶;
非极性有机溶剂为流动相,不能用丙酮、乙醇等极性溶剂
(3)硬质凝胶
多孔硅胶、多孔玻珠等;
化学稳定性、热稳定性好、机械强度大,流动相性质影响小,可在较高流速下使用。
可控孔径玻璃微球,具有恒定孔径和窄粒度分布。
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5. 手性固定相
生物、药物分子和天然有机产物的分离。
环糊精(CD) 结构:
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环糊精:
空腔内壁为弱疏水性,所有羟基在空腔的外沿呈亲水性,这使他们能与各种极性、非极性分子、离子形成包含化合物(主客体配合物)。
1984年Armstrong首次将环糊精键合到二氧化硅上用作HPLC的手性分离固定相,目前已成为十分普及的手性固定相。
全苯基环糊精分离柱特别适合于分离氨基醇类β阻断剂,而其他类型手性固定相则很难分离。
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液相色谱的流动相
1. 流动相特性
(1)流动相组成改变,极性改变,可显著改变组分分离状况。
(2)亲水性固定液常采用疏水性流动相,即流动相的极性小于固定相的极性,正相,极性柱也称正相柱。
(3)若流动相的极性大于固定液的极性,则称为反相液液色谱,非极性柱也称为反相柱。组分在两种类型分离柱上的出峰顺序相反。
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