文档介绍：第一章分子克隆技术概述
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本课程的主要内容
分子克隆概述
基因克隆工具酶
基因克隆载体和宿主
目的基因的分离
基因克隆操作过程
基因克隆的策略
目的基因在宿主中的表达
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1970年，Smith和Wilcox在流感嗜血杆菌（Haemophilus inffuenzae）分离纯化了HindⅡ，取得了突破，打破了基因工程的禁锢，迎来了改造生物的春天，为基因工程奠定了最为重要的技术基础。
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2．(“交通工具车子”)——载体
（1）有了切割与缝合（ligase）基因DNA的工具，还得有一个“车子”将重组DNA送到宿主细胞中去。
（2）1946年起，Lederberg开展了细菌性因子（F因子）的研究。50-60年代相继发现了R因子（抗药因子），CoE(大肠杆菌因子)等质粒。
（3）然而，直到1973年Cohen才能将质粒作为基因工程载体使用（至今一直是基因工程最重要最广泛使用的载体）。这是基因工程的第二个技术准备。
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3．逆转录酶－1970年Baltimove和Temin等同时各自发现了逆转录酶，打破了遗传学（生物学）中心法则，使真核基因的制备成为可能。（原因如下）
（1）真核基因组庞大而复杂，不易制得基因图谱。
（2）即使有了基因图谱，因为真核基因有内含子，不能在原核表达系统剪接出mRNA，没有成熟的mRNA就不能得到相应得产物。
（3）经过逆转录mRNA→cDNA (complementory DNA)得到的cDNA文库要比基因组文库小得多，所以筛选阳性克隆就方便得多。
有了这些理论和技术的武装，基因工程的临盆降生指日可待，Berg和Cohen两位科学的“助产士”，把基因工程接到了人间。
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四、分子克隆的技术支撑
核酸凝胶电泳技术
核酸分子连接技术
细菌转化技术
DNA序列分析技术
寡核苷酸合成技术
基因定点突变技术
聚合酶链反应（PCR）技术
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核酸凝胶电泳
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细菌转化技术
（包括感受态细胞制备）
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DNA序列分析技术
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聚合酶链反应（PCR）技术
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五、分子克隆技术的应用
分离、扩增、鉴定、研究、整理生物信息资源
大规模生产生物活性物质
设计、构建生物的新性状甚至新物种
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分离、扩增、鉴定、研究、整理生物信息资源
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大规模生产生物活性物质
野生细胞
野生细胞
分
离
工
程
酶
分离工程
基因工程
蛋白质工程
途径工程
工程细胞
发酵工程
酶工程
细胞工程
生物活性物质
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The team that cloned Dolly waited until she was seven months old to announce her existence. Creating her took 277 tries, and right up until her birth, scientists around the world were saying that cloning a mammal from an adult cell was impossible.
The very fact that at this moment, the research is proceeding underground, unaccountable, poses a real threat
设计、构建生物的新性状甚至新物种
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多利诞生的过程
为什么震惊和惊呼，我们先了解一下多利诞生的过程以及胚胎细胞克隆和体细胞克隆的区别这两个基本问题，对我们学****后面内容或许有所帮助和启发。
多利诞生的过程：
，分离基因备用。
，取出基因换上第一只羊乳腺细胞基因（“掉包”），放电激活该卵细胞，使之象正常受精卵一样进行细胞分裂，直至一定阶段，胚胎成熟。
，妊娠（同正常一样），最后产下多利。
这样一只与第一