文档介绍：食品中蔗糖的测定方法酶-比色法食品中蔗糖的测定方法,一般采用盐酸水解法。由于盐酸水解蔗糖过程中,还有其他糖类被水解为还原糖,导致测定结果偏高。本标准采用的酶- 比色法是在检索了近 20年 148 篇国外文献的基础上,经过反复实验、验证而制定的。由于酶法具有高度的专一性(β-果糖苷酶只能催化蔗糖转化为葡萄糖和果糖) ,灵敏度高,操作简便,因此测定结果准确。蔗糖酶解后的产物- 葡萄糖的测定方法,与 GB /T 16285 - 96 保持一致。食品中蔗糖的测定方法 GB /T 16286-96 酶-比色法 1 范围本标准规定了用酶-比色法测定食品中蔗糖的方法,适用于各类食品中蔗糖的测定。本标准最低检出限量为 μ g( 蔗糖)/ mL( 试液)。 2 原理在β-果糖苷酶(β- FS) 催化下,蔗糖被酶解为葡萄糖和果糖。葡萄糖氧化酶(GOD) 在有氧条件下,催化β-D -葡萄糖( 葡萄糖水溶液状态) 氧化,生成 D -葡萄糖酸- δ- 内酯和过氧化氢。受过氧化物酶(POD) 催化,过氧化氢与 4 -氨基安替比林和苯酚生成红色醌亚***。在波长 505nm 处测定醌亚***的吸光度,计算食品中蔗糖的含量。β- FS C 12H 22O 11+H 2O ────>C 6H 12O 6 (G) +C 6H 12O 6 (F) GOD C 6H 12O 6 (G) +O 2 ────>C 6H 10O 6+H 2O 2 POD H 2O 2+C 6H 5 OH +C 11H 13N 3O ────>C 6H 5 NO +H 2O 3 试剂 组合试剂盒 1 号瓶:内含β-果糖苷酶(fructosidase)400U( 活力单位) 、柠檬酸、柠檬酸三钠; 2 号瓶:内含 /L 磷酸盐缓冲液(pH = ) 200mL ,其中含 4 -氨基安替比林 0. 00154mol /L; 3 号瓶:内含 /L 苯酚溶液 200mL ; 4 号瓶:内含葡萄糖氧化酶(glucose oxidase)800U( 活力单位) 、过氧化物酶( 辣根, peroxidase)2000U( 活力单位)。 1、2、3、4 号瓶须在 4℃左右保存。 酶试剂溶液 将1 号瓶中的物质用重蒸馏水溶解,使其体积为 66mL ,轻轻摇动( 勿剧烈摇动) ,使酶完全溶解。此溶液即为β-果糖苷酶试剂,其中柠檬酸( 缓冲溶液) 浓度为 /L, pH = 。在 4℃左右保存,有效期一个月。 将2 号瓶与 3 号瓶中的溶液充分混合。 将4 号瓶中的酶溶解在 混合液中,轻轻摇动( 勿剧烈摇动) ,使酶完全溶解, 即为葡萄糖氧化酶-过氧化物酶试剂溶液。在 4℃左右保存,有效期一个月。 /L 亚铁***化钾溶液称取 亚铁***化钾[K 4 ) 6· 3H 2O, GB1273 ,分析纯] ,溶于 100mL 重蒸馏水中, 摇匀。 /L 硫酸锌溶液称取 硫酸锌(ZnSO 4· 7H 2O, GB666 ,分析纯) ,溶于 100mL 重蒸馏水中,摇匀。 /L 氢氧化钠溶液称取 氢氧化钠(GB629 ,分析纯) ,