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第六章沉淀反响
沉淀反响是指可溶性抗原与相应抗体在特定条件下发生特异性结合时出现的沉淀现象
第一节沉淀反响的特点
沉淀反响中的抗原多为了蛋白质、多糖、血清、***等可溶性物质.
沉淀反响分两个却后再将抗原溶 液加到上层,放置后,下层的抗体和上层的抗原向中间琼脂层内自由扩散,在抗原抗体浓度比例恰当处形 ,并且只能测定一个标本,所以临床检验中很少用.
平板法 是鉴定抗原抗体的最根本、：先在平板玻璃上
倾注一均匀的琼脂薄层,凝固后在琼脂板上打孔,孔径一般为了 3mm孔间距通常在 3〜5mm孔的排列可呈
梅花形、,放置湿盒 37C 18〜24小时后,琼脂中各自扩
散的抗原和相对应的抗体可在浓度比例适当处形成可见的沉淀线.
根据沉淀线的有无、形态和位置可作如下分析：
抗原或抗体的存在与否以及相对含量的估计
沉淀线如果靠近抗原孔,贝U表示抗体含量较大；
沉淀线如果靠近抗体孔,那么表示抗原含量较大；
不出现沉淀线那么说明无对应的抗体(抗原)或者抗原过量 .
抗原或抗体相对分子量的分析
抗原或抗体在琼脂内自由扩散,其速度受分子量的影响. 分子量小者扩散快,反之那么较慢.
由于慢者扩散圈小,局部浓度那么较大,形成的 沉淀线弯向分子量大的一方 ；如果两者分子量大概 相等,那么形成直线.
Ag
-O
Ab
O +
Ag
-O
1° +
1.
抗原性质的分析
两个抗原相同；
两条沉淀线互相吻合相连 ,说明抗体与两个抗原中的相同表位结合而沉淀,
沉淀线呈局部相切、说明两个抗原之间有 局部相同：
（3）两条沉淀线交叉而过,说明两个抗原完全不同.
双向免疫扩散试股
抗体效价的滴定
,稀释抗体；或者抗原和抗体双方
皆作不同的稀释,经过自由扩散,形成沉淀线,以 出现沉淀线最高的抗体稀释度为了该抗体的效价 .
抗原或抗体纯度鉴定
用混合抗原或抗体鉴定抗体或抗原,出现 一条沉淀线说明待测抗原或抗体纯,出现多条沉淀线说明不
红.
双向扩散实验简洁易行,用途广泛,但该技术灵敏度低,出现结果慢,不能精确定量,这些弱点在相 当程度上限制了它的应用.
第四节免疫电泳技术
电泳分析与沉淀反响的结合产物.
一、优点
（一） 加快了沉淀反响的速度；
（二） 电场规定了抗原抗体的扩散方向,使其集中,提升了灵敏度；
（三） 可将某些蛋白组分根据其带电荷的不同而将其分开,再分别与抗体反响.
本法既具有抗原抗体反响的高度特异性,又具有电泳技术的高分辨率和快速、微量等特性,因此其应 ,免疫电泳技术逐步开展为了对流免疫电泳、火箭免疫电泳、免 疫电泳、免疫固定电泳等多项实验技术,广泛用于科学钻研和临床实验诊断分析.
二、对流免疫电泳 双向免疫扩散与电泳相结合的 定向加速 的免疫扩散技术.
,大多蛋白质带强负电荷,在电场中向正极移动；而 IgG等电点偏高（pH6〜7）, 、 电渗作
用下,随水流向负极,电渗引向负极移动的液流速度超过了 IgG向正极的移动速度,因此抗体移向负极,
在抗原抗体最适比处形成沉淀线.
IgG作为了蛋白质在电泳中比拟特别, 4个亚型有不同的表现,IgG3和IgG4与一般蛋白质无异,泳向正
极,而IgGl和IgG2那么因其带电荷少,受电渗的作用力大于电泳, 了 IgG的特别电泳形式：一局部泳向正极,另一局部泳向负极,在抗体孔两侧都有抗体存在,因此所谓对 流只是局部IgG的电渗作用所致
三、火箭免疫电泳
单向免疫扩散与电泳相结合的一项 定量检测技术,实质上是 ,将抗体混 合于琼脂中,样品孔中的抗原置于负极端,电泳时抗体不移动,抗原向正极泳动,随着抗原量的逐渐减少, 抗原泳动的基底区越来越窄,抗原抗体分子复合物形成的沉淀线逐渐变窄,形成一个形状如火箭的不溶性 复合物沉淀峰.
当琼脂中抗体浓度固定时,峰的高度与抗原量呈正相关,因此用标准抗原作对照,抗原浓度为了横 坐标,峰的高度为了纵坐标,绘制标准曲线,待测样品浓度就可根据沉淀峰的高度在标准曲线中计算获得.
影响火箭电泳的因素很多,因此在操作时应注意以下几点：
所用琼脂应是无电渗或电渗很小的,否那么火箭形状不规那么.
注意电泳终点时间确实定,如火箭电泳顶部呈不清晰的云雾状或圆形,那么表示