文档介绍：浅谈蛋白质质谱分析
体时，由于基质分子经辐射所吸收的能量，导致能量蓄积并迅速产热，从而使基质晶体升华，致使基质和分析物膨胀并进入气相。MALDI所产生的质谱图多为单电荷离子，因而质谱图中的离子与多肽和蛋白质殊、高效的生物功能肽的肽库是现在的研究热点之一。现有的肽和蛋白质测序方法包括N末端序列测定的化学方法Edman法、C末端酶解方法、C末端化学降解法等，这些方法都存在一些缺陷，如测序速度较慢、 样品用量较大、对样品纯度要求很高、 对于修饰氨基酸残基往往会错误识别而对N末端保护的肽链则无法测序。C末端化学降解测序法则由于无法找到异硫***酸苯酯（PITC）这样理想的化学探针，其发展仍面临着很大的困难。由于蛋白降解为多肽技术的提升以及质谱测定的飞速发展， 使得质谱广泛应用于蛋白质的分析和测定。近年来随着ESI- MS及MALDI等质谱软电离技术的发展与完善， 检测限下降到fmol级别， 可测定分子量范围则高达100 kDa， 使蛋白质分子测定成为可能。目前基质辅助激光解析电离/飞行时间质谱法（MALDI- TOF/MS）已成为测定生物大分子尤其是蛋白质、多肽分子量和一级结构的有效工具， 也是当今生命科学领域中重大课题——蛋白质组研究所必不可缺的关键技术之一。目前蛋白质组研究为蛋白质提供了一级结构（序列）谱库，能为解析FAST（超高速）谱图提供极大的帮助，并为确证分析结果提供可靠的依据。
5 蛋白质质谱分析的应用
有研究表明，用MALDI- TOF质谱分析蛋白质最早一例是于1988年提出用紫外激光以烟酸为基质在TOF上测出质量数高达60 kDa的蛋白质， ％， ％～％。质谱技术主要用于检测双向凝胶电泳或 “双向” 高效柱层析分离所得的蛋白质及酶解所得的多肽的质量，也可用于蛋白质高级结构及蛋白质间相互作用等方面的研究，3条肽段的精确质量数便可鉴定蛋白质。MALDI- TOF/MS以及ESI- MS可以清楚地解析蛋白质多肽的一级结构。近年来，FABMS- MS发展突飞猛进，推动了蛋白质多肽二级结构的测定，其数据采集方面的自动化程度、 检测的敏感性及效率都大大提高。其主要是通过MS- MS的方式将2个以上质谱仪器进行联合运用，采用前质谱选择特定肽段， 破坏后进行后续质谱的分析， 可以有效实现二级质谱对蛋白质的分析。大规模数据库和一些分析软件（如SEQUEST）的应用使得FABMS- MS可以进行更大规模的测序工作， 如采用2D电泳及MS技术对整个酵母细胞裂解产物进行分析，已经鉴定出1 484种蛋白质，包括完整的膜蛋白和低丰度的蛋白质；分析肝细胞癌患者血清蛋白质组成分， 并利用质谱鉴定磷酸化蛋白及采用质谱技术研究许旺细胞源神经营养蛋白（SDNP）的分子结构
等。科学工作者通过多种方式收集蛋白质的结构信息将其绘制成为肽质量指纹图谱，可以有效地分析蛋白性质， 为医学、生命科学提供信息支持。如目前通过分离手段以及质谱联合手段发现的组织蛋白酶B、热急蛋白27、mRNA连接蛋白P62等对癌症治疗起到了非常重要作用。广泛地采用多种分离手段联合质谱对生物大分子进行全面的精确的分析取得了突出成效。如采用双向凝胶电泳- 质谱测定技术、液质联用 （HPLC- MS）、气质联用（GC- MS）、ESI-MS