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叶绿素提取实验.docx

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实验10叶绿体色素的提取别离及其性质鉴定
、目的
学会叶绿体色素提取和别离的方法,了解叶绿体色素的性质.
、材料用具及仪器药品
(1) 层析液配方:石油酰 20m精品资料,欢迎大家下载!
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实验10叶绿体色素的提取别离及其性质鉴定
、目的
学会叶绿体色素提取和别离的方法,了解叶绿体色素的性质.
、材料用具及仪器药品
(1) 层析液配方:石油酰 20ml+***2ml+苯1ml
(2) 天平、研钵、烧杯、量筒、滤纸、外表皿、剪刀、 90-95%乙醇、汽油、漏斗、滴
(3) 菠菜、木茨等叶子
三、 原理
叶绿体含有叶绿体色素,叶绿体色素主要包含有 Chla、Chlb、叶黄素和胡萝卜素,可
用有机溶剂乙醇、***. 它的
原理是利用混合色素中各个成分物理、 化学性质的差异,分别以不同程度分布于两相中 (即
固定相和流动相).由于它们以不同的速度移动,从而到达别离的目的.
叶绿体色素容易受光的破坏, . 叶绿素分子的镁可
被铜替代,.
四、 方法
1、 纸层析法别离叶绿体色素(方法 1)
(1) 称取新鲜叶片(木茨、菜心、菠菜等叶均可) 1克,剪碎,放在研钵中,加乙
醇5m 1,共研磨成匀浆,静置 5分钟.
(2)用滴管吸取上面的色素提取液 4〜(滤纸要平放
在外表皿或培养皿上).待色素点风干后,向该色素点上慢慢滴加汽油,使四种色素(叶绿 素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素)在滤纸上别离出来,四种色素在滤纸上的移动速度是 胡萝卜素(橙黄色) >叶黄素(黄色) >叶绿素a(蓝绿色)〉叶绿素b (黄绿色).
2、 纸层析法别离叶绿体色素(方法 2)
(1)称2克新鲜绿色叶片,剪碎,放在研钵中,参加 5ml乙醇,共研磨成匀浆,过滤, 该滤液即为了色素提取液.
(2) 取一块预先枯燥处理过的定性滤纸,将它剪成长约 10cm,宽约1cm的滤纸条.
(3) (约距这一端的 1cm处)划出一条滤
液细线,等滤液枯燥后,再重复划 4〜5次.
(4) 将滤纸条的另一端(约距这一端 1cm处)拆成“ V'字形,并将它挂在放有层析液
的烧杯壁上(注意:色素线要略高于层析液面,且滤纸条下端最好不要碰到烧杯壁) ,盖上
培养皿.
(5) 经几分钟后,打量色素带的分布,最上端为了胡萝卜素,其次是叶黄素,再次是叶 绿素a,最后是叶绿素 bo
3、叶绿体色素的性质鉴定
(1) 叶绿体色素的提取
取菠菜(或其他植物)叶子 2g,加石英砂和碳酸钙少许,乙醇约 5ml,研磨成匀浆, 再加乙醇15ml,用漏斗过滤,即为了色素提取液.
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(2) 叶绿素的荧光现象
取上述色素乙醇提取液少许于试管中,在反射光和透射光下打量色素提取液的颜色有
,即为了叶绿素产生的荧光现象.
(3) 光对叶绿素的破坏作用
取上述色素乙醇