文档介绍：实验名称高效液相色谱法测定磺胺类药物(联磺甲氧苄啶片)
实验目的
掌握磺胺类药物的高效液相色谱(HPLC)分离和定量分析的原理及实验条件的建立;
熟悉HP1100型高效液相色谱仪的仪器构造和一般操作方法。
实验原理
磺胺类药物是含有磺胺基团的合成抗菌药的总称。结构式(见下图), 磺胺类药物能抑制多种
磺胺嘧啶、磺胺甲噁唑的结构式
细菌和少数病毒的生长和繁殖,用于防治多种病菌感染。磺胺是这类药物的基本结构,本身抗菌作用较弱,现已少用。其衍生物可分为两类:一类如磺胺噻唑、磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶等,口服后在肠内易被吸收,可在全身发挥治疗作用。另一类如磺胺脒、酞磺胺噻唑、息拉米等口服后在肠内不易被吸收,能保持有效浓度,发挥抗菌作用。它们的性质相近, 一般的方法难以分离测定。高效液相色谱可直接分离、测定,测定条件温和, 结果满意。
仪器和药品
仪器:
HP1100高效液相色谱系列;四元泵;二极管阵列DAD检测器;在线溶剂脱气机;溶剂过滤器,样品过滤器。
药品:
、HPLC乙醇、二次蒸馏水。
: ,用乙醇定容至100mL容量瓶中,作为标准贮备液。此贮备液用纯水经不同程度的稀释后可制成标准系列溶液, 供制作标准曲线用。本贮备液的浓度为标准物质100µg×ml-1。
实验步骤
1. 样品的处理
-, 加乙醇溶解,定容至25mL容量瓶中。取样品溶液做适当稀释, 用外标法测定磺胺嘧啶和磺胺甲噁唑的含量。
2. 确定色谱条件
色谱柱: ODS C-18,5µm ,×200mm。
流动相:甲醇+1% 乙酸水溶液=40+60。
等度洗脱: ml /min。
检测器: 二极管阵列DAD检测器。
检测波长: 275nm。
3. HPLC分离磺胺类药物的色谱图
4. 磺胺类药物的定量测定
对磺胺嘧啶和磺胺甲噁唑的定量测定, 可取标准贮备液,经HPLC乙醇不同程度的稀释后制成含标准物质10、20、30、40、50µg×ml-1的标准溶液系列。在上述步骤2 实验条件下每次定量进样10mL, 每个样品平行进样三次, 用色谱工作站建立五级校正表和标准曲线, 再测定未知样品,用外标法测定磺胺类药物中磺胺嘧啶和磺胺甲噁唑的含量。
数据处理
采用外标百分比法测定,打印分析报告。
计算出每片药品()中磺胺嘧啶和磺胺甲噁唑的含量(mg)。
注意事项
流动相:,避免尘埃阻塞色谱柱,使用前需要超声波脱气或使用在线脱气机脱气(最好的脱气方法是用氦气,但价格昂贵,一般不用)。
四元泵:使用前先要打开排气阀,排除流动相管线中的气体,一定不要让气泡进入系统。
检测器:要进行全波长扫描,得到