文档介绍：HPLC常见问题和对策
HPLC常见问题和对策
HPLC常见问题和对策
HPLC色谱常见问题
,有时发生快速变化，原因何在？如何解决？
2。液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？
。在流动相中加入少量竞争物，如三乙基胺（TEA）,将会使硅醇基的成键能力饱和,从而能保证不同牌号柱子上的相对保留时间具有较好的重现性.
如分离情况可以，系统稳定，达到系统适用性要求,就不必保留时间的重现。
，请问为什么？
,而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。
HPLC常见问题和对策
HPLC常见问题和对策
HPLC常见问题和对策
① 拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查；
② 把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降,否则是管路堵塞，需清洗,若压力下降,再检查;
③ 将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）.这时，如果柱压仍不下降，再检查;只用于使用过的柱子.
④ 更换柱子入口筛板,若柱压下降,说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高,，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题，SGE提供的Rheodｙｎe ７315型过滤器就是解决这一问题的最佳选择。
7。色谱双峰产生的可能及判断和处理
HPＬC分析中，在色谱柱正常,样品灵敏度足够,分析方法合适，色谱峰在出峰时间较短的条件下(不包括梯度），峰型应对称而尖锐。但是，在对样品了解程度不够，方法不妥,样品处理方法及进样方式不合理下，会出现各种意想不到的问题,而对色谱峰难以作出合理的解释,尤其对于新手更是如此。下面根据本人几年工作的体会，提出一些看法，向同仁指教。
色谱双峰指的是明是一种物质，但在色谱图中出现双峰，而表明含二种物质。我将这种情况分为四种原因。
1 色谱柱
如果你分析样品时发现每个色谱峰都双峰出现（出峰越快，双峰的可能性会减少)，尤其采用单一纯物质时，可以肯定色谱柱出问题-柱头受损或柱头固定相变脏或流失。如果进样量少，原来色谱柱正常,色谱峰的形状多为一大峰带一小峰，不一定拖尾，这一般应是柱头受堵，将色谱柱反过来接，用流动相冲洗或酸洗或其它溶剂，将堵在柱头的残留物冲掉,再反过来，一般情况下就行了。当然不反冲,正冲有时也会正常的．如果峰拖尾，双峰强弱相差不大，柱头固定相变脏或流失可能性更大，这是可以将进样那头拧开，将微孔滤片超声,柱头刮去一部分填料，重新填上新填料拧紧，不过这种活，需要一定技术，同时不能老干那种事,否则用不了几次，色谱柱就会应柱效很低而报废。
HPLC常见问题和对策
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2 溶剂极性及进样量
许多HＰLC分析者对此可能不以为然，一般的HPLC的书籍和文献都不会提到这方面的内容，而这确是双峰产生的一个很重要的原因。目前HPLC分析多为反相色谱，流动相多为甲醇、乙腈、水,加各种添加剂以改善分离性能。样品一般用与流动相相溶的溶剂溶解。最佳的溶解方法是用流动相溶解，,如纯甲醇、纯乙腈,纯乙醇，而分析体系中以水为主,样品进样量大，如定量管为20uｌ，此条件下完全可以肯定，单一的纯物质出双峰,第二峰比第一峰小（每次都不太一样）,且拖尾,保留时间会提前(相对进样量少而言）,将进样量减少一半以上，,，另一个原因是，进样量不一定大，但绝对量很大，色谱图上的双峰紧靠在一起，基本上齐高,不拖尾(如果出峰很快,也可能是色谱柱问题）。将样品稀释再进样就可以了,这是由于进样量过大,色谱柱过载造成的。
３ 样品的特性
有些样品由于其化学结构的特点，存在互变异构现象,而这种互变异构体无法分开,而是以一个动态平衡存在。在色谱分析时，在一个特定的条件下,一种物质将出现双峰，双峰靠的很近,基本齐高，不拖尾，条件稍一变化，尤其pＨ，双峰现象将消失，如红霉素等。有的样品紫外的色谱图上看不到双峰,但在LC-MS下，用质谱检测器,其质谱的总离子流图上较明显，例如我分析过的农药啶虫眯（吡虫清）。
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4 参数 记录的参