文档介绍：乙型肝炎病毒颗粒超离纯化
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常用离心机
简介
BECKMAN
HITACHI
SORVALL
HEREUS
100000g离心3h
沉淀 上清液
（核糖体） （可溶性蛋白）
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速度区带离心法
原理：在离心管预先装入密度梯度材料（如蔗糖，CsCl 等），样品铺在梯度液顶部。同梯度液一起离心，利用各颗粒在梯度液中的沉降速度不同，使具有相同沉降速度的颗粒处于同一梯度层内，达到分离目的。
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密度梯度离心法(预制梯度)
在离心之前在管中预先形成线性或非线性梯度,将样品加入离心管中,经长时间平衡离心,使样品颗粒按其密度不同在梯度液中分布,这时颗粒密度等于周围介质的密度ρp=ρm
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密度梯度离心法(离心自成)
利用某些重金属盐(如Cscl 等)同样品均匀混合,,重金属盐重新分布,,样品中原先均匀分布的病毒颗粒随周围介质密度的变化而上浮下沉,最终进入与自身浮力密度相同的特定位置,只要转速、温度不变,则延长离心时间也不能改变这些颗粒的成带位置.
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,超过该密度 ,减速
rpm实际= ×rpm max
转子超过寿命也要减速使用
转速限制
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HBV颗粒分离
1 .差速离心分离:HBV 阳性血清用缓冲液对 倍稀释,4000rpm离心30min后,,使病毒颗粒沉淀,得到粗病毒液.
:在离心管中加入70%(w/v)蔗糖2ml,上加20%(w/v)蔗糖4ml,将粗病毒液加在梯度液顶部,于30,000rpm离心4hr. 收集20%与70%(w/v)蔗糖中间混浊的中间层.
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:-,SW41 转头100,000g离心24小时后,-.
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预制梯度等密度离心分离:
石蜡油
30% 蔗糖2ml
40% 蔗糖2ml
50% 蔗糖2ml
60% 蔗糖2ml
70% 蔗糖1ml
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梯度液的密度测定
精密加样器, 万分之一或十万分之一秤
恒温,用纯水作对照.
(Abbe折光仪)
ρ=an-b
n:液体的折光率 a,b:常数随介质而异
对温度敏感
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冠状病毒：+RNA病毒， 包膜病毒 75%酒精可以灭活该病毒
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